目的 细菌移位(bacterial translocation，BT)是创伤后期脓毒症及多器官功能不全的重要成因，其发生机理尚未明确。树突状细胞(dendritic cells，DC)是目前所知功能最强的专职抗原递呈细胞，也是抗原递呈细胞中唯一能激活初始型T细胞的APC细胞是近年来免疫研究热点之一。通过分离肠系膜淋巴结DC，为观察研究失血性休克后DC形态、功能变化及其细胞生物学特性的改变提供了必要条件，我们试图建立一个简便、经济、可靠的DC分离方法，并通过测定其细胞表面MHC-Ⅱ表达，探讨肠道树突状细胞在失血性休克后BT发生中的作用及两者关系。 方法 实验分两部分，均以成年健康Wistar大鼠作为实验动物，首先从正常大鼠肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes，MLNs)分离并纯化树突状细胞同时掌握细胞分离所需最适细胞浓度，并通过免疫组化染色鉴定其纯度。然后将40只大鼠随机分为正常对照组、失血性休克组。正常组动物不施加何处理，失血性休克组全部按Wiggers法复制失血性休克动物模型，并分别于术后12小时无菌条件下取肠系膜淋巴结，MLNs标本分两份，一部分经胶原酶消化后通过密度梯度离心法、淘洗法分离树突状细胞，细胞分离纯化后细胞计数，标记小鼠抗大鼠OX-6单克隆荧光抗体，流式细胞仪分析MHC-Ⅱ分子表达；另一部分石蜡包埋切片，行抗S-100蛋白免疫组化染色，对MLN皮质区内DC观察并记数。 结果 一、经密度梯度离心及淘洗法分离出肠系膜淋巴结树突状细胞，S-100蛋白免疫组化染色后阳性率在87％以上，HE染色后在高倍镜下可见DC特征性树枝状突起； 二、肠系膜淋巴结切片染色，树突状细胞于休克后在数量上明显增多，于复苏后12小时达到高峰(15.5±2.8个／HP)，并呈区域性密集分布，DC细胞表面出现大量突起，环抱T淋巴细胞； 三、流式细胞仪检测MHC-Ⅱ分子表达，休克组较假手术组差别显 著，提示休克后MLN中DC抗原递呈能力明显增强； 四、休克组肠系膜淋巴结分离的树突状细胞数量与其MHC．11分子 表达结果一致，呈正相关关系，提示休克后移位至MLN的DC为表达 高水平抗原递呈能力的成熟DC。 结论 本研究初步建立了以密度梯度离心和淘洗法0anning）为 技术手段分离大鼠肠系膜淋巴结DC的经济、可靠而相对简便的方法， 为进一步研究DC形态结构与功能奠定了良好的基础。通过复制大鼠失 血性休克模型，证实了创伤后大鼠肠道DC会出现与炎症刺激条件下相 类似的迁移、活化现象。实验发现，失血性休克复苏后12小时后肠系 膜淋巴结DC数量达到高峰，标记小鼠抗大鼠OX－6单克隆荧光抗体后 经流式细胞仪检测，发现DC细胞表面MHC－11分子表达显著增高，与 DC数量改变一致，说明DC移位至肠系膜淋巴结的途径与细菌移位的 淋巴路径完全一致，两者之间密切相关。