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三七(Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen)属五加科人参属植物,具有很好的药理作用,现已广泛应用于治疗高血压、高血脂及心脑血管等疾病,是一种市场需求量极高的药用植物。但三七因受自然环境、生态气候、可耕作面积等因素的影响,广泛栽培受到严重限制。采用组织培养技术,除了可以避免这些问题,还能集中生产植物中有效的次生代谢产物,以此缓解三七市场短缺及野生资源保护问题。本研究以云南文山一年生三七苗为外植体材料,利用植物组织培养技术,对其进行愈伤组织诱导、愈伤组织继代、细胞悬浮培养、次生代谢产物积累等研究,优化出适和的培养条件,从而建立起高效的悬浮培养体系,为后续放大培养及工业化生产提供理论依据,对珍惜濒危药用植物资源的可持续开发具有重要意义。本实验主要研究结果如下:1.愈伤组织培养阶段,通过研究不同外植体、不同培养基、不同激素配比对三七愈伤组织诱导及继代的影响,筛选出最适培养条件。结果表明:利用三七叶和根进行愈伤组织诱导,接种于培养基MS+2.0 mg·L-1 2,4-D+0.5 mg·L-1 6-BA条件下进行的继代培养效果最好。2.悬浮培养体系建立阶段,以疏松易碎、生长旺盛的胚性愈伤组织为起始材料,从基本培养基类型、激素种类和浓度、初始接种量、转速、碳源浓度、pH等方面优化生长条件,并绘制悬浮细胞的生长曲线。结果表明:在MS+2.0 mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 KT+30 g·L-1 蔗糖,pH 5.8,初始接种量 60g·L-1,摇床转速110 rpm的条件下,细胞长势最佳,细胞生长呈“S”形曲线,在接种后第20d生物量达到最大。3.次生代谢产物积累阶段,主要分析了总氮量、NO3-/NH4、茉莉酸甲酯、水杨酸对三七总皂苷积累的影响。结果表明:总氮量为60 mmol·L-1,30 mmol·L-1 KNCO3+15 mmol·L-1 NH4NO3,即NO3-/NH4+=3:1时,总皂苷含量达到最大;低浓度的茉莉酸甲酯对三七总皂苷的积累有明显的促进作用,当其浓度为50μmol·L-1时,总皂苷含量最大;水杨酸对三七总皂苷的积累并无明显的促进作用,当其浓度为100 μmol·L-1时,总皂苷含量最大。