【摘 要】
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目的:鼻咽癌(NPC)的发病与EB病毒感染密切相关,EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1(LMP1)是其重要致瘤蛋白。本研究探讨LMP1第三个功能活性区对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响及机制,为揭示EBV
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目的:鼻咽癌(NPC)的发病与EB病毒感染密切相关,EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1(LMP1)是其重要致瘤蛋白。本研究探讨LMP1第三个功能活性区对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响及机制,为揭示EBV的致瘤机理提供实验依据。方法:收集RV-LMP1和RV-LMP1△232-351逆病毒,分别感染鼻咽癌干细胞SP18,G418筛选后汇合克隆,建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1(LMP1△232-351)的SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞系。然后采用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对SP18生长的影响,其次选用流式细胞仪检测细胞周期,并计算细胞增殖指数。另外,利用基因芯片检测LMP1及LMP1△232-351对SP18细胞生长影响的差异表达基因,RT-PCR验证SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞中部分基因的表达。结果:1、细胞生长曲线、软琼脂集落和平皿克隆结果显示,SP18-LMP1△232-351细胞较SP18-LMP1细胞生长速度减慢,集落数目减少,体积变小(n=3,p<0.01);2、流式细胞仪检测结果显示,SP18-LMP1△232-351细胞较SP18-LMP1细胞增殖指数降低(n=3,p<0.01)。3、基因芯片检测结果显示,在SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△232-351细胞间共测出428个差异表达基因,其中与细胞生长增殖相关基因135个(上调基因59个,下调基因76个)。6、RT-PCR验证部分基因的表达结果与基因芯片检测结果基本一致。结论:1、LMP1-CTAR3是其促SP18细胞生长的重要功能活性部位。2、LMP1-CTAR3通过增加细胞的增殖指数,促SP18细胞的生长增殖。3、LMP1-CTAR3通过影响IL1A和Wnt6基因的表达,调节SP18细胞的生长。
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