论文部分内容阅读
玉米赤霉烯酮(zearaleonoe,ZEN)是污染粮油食品的主要真菌毒素毒素之一,包括中国在内的多个国家制定了严格的限量标准。ZEN是镰刀菌属菌在一定条件下产生的次级代谢产物。ZEN严重威胁着人类健康并导致我国畜牧养殖严重的经济损失。如何削减ZEN污染成为我国真菌毒素污染粮食安全合理利用的急迫任务,本研究旨在开辟一条利用生物技术降解毒素的方法,主要开展了高效降解ZEN菌微生物菌株的筛选、降解机制解析等工作,主要归结如下：在前期工作的基础上,建立高效的ZEN降解菌株筛选方法,主要通过以ZEN为唯一碳源在无机盐培养基中对菌株进行筛选培养、以LB为基础培养基并加入ZEN与菌株进行共培养和以ZEN为唯一碳源在无机盐培养基中对稀释的样品进行富集培养筛选三种方法来获得可降解ZEN的菌株。在富集培养和纯化分离的基础上,本研究共获的9株可降解ZEN的菌株,其中3株降解效果较好。通过生理生化,结合形态学特征,完成了其中两株菌株的初步鉴定,并在完成16S rRNA测序和聚类分析的前提下对菌株进一步进行了鉴定,分别为2株芽孢菌。对三株可降解菌株分别命名为Y64-3、Y84-7及ASAG7,通过进一步稳定实验表明,三株菌的降解率分别达到了60.08%、54.90%及99%。对降解菌株的生理特性和降解特点进行了研究,明确了菌株ASAG7在LB发酵培养基、菌株随时间生长的曲线和培养的合适温度为28℃,同时明确了菌株ASAG7随着时间的变化的降解能力,并证明了菌株是通过分泌解酶对ZEN产生降解作用。绘制了3株菌株对ZEN清除效果的时间-降解率曲线图,特别是确定了菌株ASAG7可大量产生对ZEN具有降解效果的酶的发酵培养基。初步分析菌株ASAG7对ZEN的降解机制,质谱表明两株菌对ZEN降解产生了新的降解物质,并对ASAG7菌株的降解机制进行了二级质谱分析,初步推断菌株的降解机制。以上菌株的获得和降解机制的分析结果,将为克隆相关降解的编码基因和应用提供了良好的材料。