论文部分内容阅读
桉树青枯病是由茄拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种系统性维管束病害,也是一种具有毁灭性的土传病害,给桉树产业带来了极大的损失。本研究通过抗生素对尾叶桉和番茄内生细菌种群的影响探索桉树抗病性与内生细菌种群的关系,同时通过抗生素处理尾叶桉后接种拮抗细菌,探索其内生细菌种群变化对拮抗菌应用于桉树青枯病防治的影响,为筛选和利用生防菌寻找更广泛的途径。1、桉树青枯病拮抗细菌的筛选和定殖力的测定利用枯草芽孢杆菌Y4和小麦无菌实生苗的内生细菌(编号分别为CN181、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7和G8),采用平板对峙法和水培系统浸根法筛选对桉树青枯病菌具有拮抗作用的菌株。结果表明:平板对峙法筛选试验中G1、G4、G6、G8、CN181和Y4在KB培养基上均可形成宽而透明的抑菌带,其中菌株G6、CN181和Y4的抑菌效果最好,抑菌带宽度均在30mm以上,对青枯病菌具有较好的拮抗作用。水培系统浸根法进一步测定其对桉树青枯病的作用,结果显示它们对桉树青枯病均具有一定的防治效果,但Y4菌株处理后具有延迟青枯病发病时间的作用,且发病率均低于其他菌株,仅为26.7%;综合以上两种方法确定Y4菌株对青枯病菌抑制效果较好。采用水培系统浸根法测定了Y4菌株在尾叶桉苗内的定殖情况,结果表明,在Y4菌悬液处理1d后即可在尾叶桉内检测到该细菌,并且定殖量达到了3.17×105CFU·g-1,之后其定殖量逐渐减少,在第20d时依然可以检测到7.84×104CFU·g-1。表明Y4在尾叶桉苗内前期定殖量大且迅速,在一定时间内可以有效地定殖于尾叶桉内,但在后期定殖力减弱。2、抗生素处理对Y4菌株在尾叶桉内的定殖和室内生防效果的影响利用抗生素处理尾叶桉实生苗后,研究其对Y4菌株在尾叶桉内的定殖和室内生防效果的影响。结果表明:在利福平、四环素、链霉素和氯霉素浓度分别为70、60、50和30mg·L-1时对尾叶桉苗不会造成伤害。室内对Y4拮抗菌防治桉树青枯病的测定结果表明,抗生素处理后接种Y4菌株可以提高尾叶桉对桉树青枯病的抗性,但各抗生素的作用表现不同,发病率最低的为利福平和四环素处理的尾叶桉。抗生素处理尾叶桉后接种Y4菌株,第6d时在尾叶桉内分离到的Y4菌落数量最多,且以利福平处理的最多。同时在土壤系统中Y4菌株定殖量变化的稳定性较水培系统浸根处理的好,但随着处理时间的延长,Y4菌株定殖量均逐渐较少。测定Y4菌株在尾叶桉不同部位的定殖时,发现在尾叶桉各部位中Y4菌落数量的分布规律呈递增趋势,即:叶﹤茎﹤根。随着处理时间的变化不同抗生素处理尾叶桉后对Y4菌株在其各部位定殖的影响不同,利福平和氯霉素处理均有利于Y4菌株在根、茎、叶各部位的定殖。链霉素和四环素处理尾叶桉第9d时,对Y4菌株在茎和叶部表现促进作用,根部作用不明显,其他处理时间对其定殖均表现抑制作用。3.抗生素对番茄和尾叶桉内生细菌种群结构变化与其抗病性的关系以番茄和尾叶桉实生苗为试验材料,测定了3个浓度的利福平(20、40和60mg·L-1)对番茄植株内生细菌种类、群落数量和青枯病抗性的影响,以及不同种类的抗生素对尾叶桉的内生细菌群落的影响。结果表明,4~5叶期番茄植株在利福平溶液浓度不超过60mg·L-1时生长良好。各浓度利福平在不同处理时间内对番茄植株内生细菌群落产生了刺激或抑制作用,使番茄植株各部位内生细菌的种类和数量出现了多样性的变化。这些变化使番茄植株提高了其对青枯病菌的抗性,尤其是利福平40mg·L-1处理组在第15d时,接种青枯病菌的番茄植株发病率只有45.8%。在尾叶桉正常生长不受影响的情况下,各抗生素中利福平、四环素的最终处理浓度分别为70和80mg·L-1,链霉素和氯霉素为50mg·L-1。经不同抗生素处理后,在不同的处理时间节点上尾叶桉苗内生细菌群落受到不同程度的影响,其内生细菌的种类和数量出现了多样性的变化。在测定抗生素处理后尾叶桉抗病性时,发现尾叶桉在抗生素处理前期的发病率较后期的低,且在尾叶桉根、茎和叶部分离到的内生细菌群落多样性也较丰富,并以氯霉素处理后尾叶桉内分离到的内生细菌种类数和菌落数最多,该处理组发病率也最低,仅为46.7%。说明抗生素引起的内生细菌群落多样性的变化可以影响尾叶桉对青枯病菌的抗性。