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第一部分AD患儿/小鼠模型皮损肥大细胞表面非IgE活化通路受体MrgprX2(B2)表达研究目的:观察内/外源性特应性皮炎皮损处肥大细胞MrgprX2(B2)的表达及与正常对照的差异。方法:收集内、外源性特应性皮炎患儿皮损和正常儿童皮肤以及经卵清蛋白(OVA)致敏诱导的特应性皮炎小鼠模型皮损处皮肤组织,常规HE和甲苯胺蓝染色观察其病理改变及肥大细胞浸润数量,免疫荧光检测皮损中肥大细胞表面IgE高亲和力受体FcεRI和非IgE通路受体MrgprX2的表达情况;提取皮损组织RNA,在转录水平上检测MrgprX2(B2)的表达水平;酶消化法获得AD患儿皮损组织细胞混悬液,采用流式技术检测肥大细胞表面MrgprX2表达。ELISA检测AD小鼠模型血清total-IgE和OVA-sIgE,RT-PCR检测其皮损处炎症因子IL-4,IL-17A,IFN-γ,TSLP,IL-33的表达水平。结果:特应性皮炎患儿及特应性皮炎小鼠模型皮损处HE染色可见较正常对照皮肤组织表皮显著增厚,灶性角化不全或角化过度,表皮部分海绵样水肿,真皮乳头层及真皮浅层血管周围伴大量淋巴细胞和蓝紫色的肥大细胞浸润(P<0.001,P<0.01);内源性特应性皮炎皮损肥大细胞数量及其表面IgE高亲和力受体FcεRI的表达较外源性特应性皮炎有降低的趋势,但无明显统计学差异,但二者均显著高于正常儿童的表达(P<0.001,P<0.001);MrgprX2表达在患儿皮损处肥大细胞膜上,内、外源性特应性皮炎患儿其MrgprX2~+肥大细胞数量及其百分比均无明显差异,但都显著高于正常儿童(P<0.001,P<0.05);在RNA水平和蛋白水平,MrgprX2的表达也高于正常儿童(P<0.01,P<0.05),同样在内、外源性特应性皮炎之间无明显差异。经OVA诱导的特应性皮炎小鼠模型,其total-IgE和OVA-sIgE较对照组升高(P<0.01及P<0.05);其表皮炎症反应及真皮浸润的肥大细胞数目均高于对照组(P<0.01);在RNA水平上,AD小鼠和正常小鼠的IFN-γ表达水平无明显差异(P>0.05),但试验组的IL-4,IL-17A,TSLP,IL-33以及MrgprB2的RNA表达均较正常对照升高(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.01及P<0.01)。结论:特应性皮炎皮损中肥大细胞表面非IgE活化通路MrgprX2(B2)受体表达量较正常对照升高,但在内、外源性特应性皮炎的MrgprX2的表达未见明显差异。第二部分Dock5通过调节BCR信号和肌动蛋白重组来调控外周B细胞的分化目的:探讨Dock5对B细胞发育、分化及B细胞受体(BCR)信号的影响。方法:以Dock5基因敲除小鼠为动物模型,提取小鼠的骨髓细胞和脾脏外周单个核细胞,通过流式检测B细胞在骨髓和外周的发育情况;提取小鼠脾脏B细胞及其蛋白,Western-Blot检测BCR正向信号分子表达水平的改变;TIRFm检测B细胞早期活化事件BCR信号、膜分子信号及肌动蛋白(F-actin)信号的改变。结果:Dock5敲除小鼠骨髓B细胞的发育受到轻微影响,外周滤泡(FO)B细胞和边缘区(MZ)B细胞数量明显降低;影响FO和MZ分化成熟的BCR重要的正向信号分子CD19和Btk,以及远端正向信号Akt,其蛋白磷酸化水平均明显降低;B细胞活化后其膜表面p CD19和p Btk的信号强度也同样降低,F-actin的重组受到影响,BCR簇的聚集和B细胞的扩展较WT均有明显的滞后和降低。结论:Dock5通过调控CD19-Btk信号轴和actin的重组来调节外周B细胞的发育。