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目的:通过对S D大鼠默克尔细胞(merkel cell,MCs)的提取、分离、培养及鉴定,观察局部注射MCs联合美宝湿润烧伤膏(MEBO)外用对大鼠足底创面神经再生的影响。方法:1)取新生SD大鼠(1~3d)足垫、须垫及背部皮肤,采用酶消化法分离提取MCs,接种于多聚赖氨酸(PLL)包被的培养瓶内,通过细胞免疫组织化学法测定细胞角蛋白CK20的表达,qPCR检测MCs中Piezo2 mRNA的表达,ELISA法检测培养第2d、4d、6d、8d、10d细胞分泌CGRP情况。2)建立SD大鼠足底创面模型,按照干预方式的不同分为如下五组:A组(MCs注射+MEBO组);B组(MCs局部注射组);C组(MEBO外用组);D组(阴性对照组);E组(鼠神经生长因子注射阳性对照组)。细胞组用MCs 1×106个/mL分别注射于创面基底中央及创缘3、6、9、12点标记处,24小时后追加1次,每次每个部位25μL;MEBO组按相应分组给予MEBO外用,每日换药一次,直至创面愈合。阳性及空白对照组分别予等体积鼠神经生长因子及PBS注射。观察创面愈合时间,计算各组创面各时间点愈合率,棉拭子检测足底感觉恢复情况,分别于干预后7d、14d、21d三个时相各组分别随机抽取6只大鼠,切取组织,制作石蜡切片,免疫荧光染色观察新生皮肤神经纤维生长情况。3)每组大鼠均于造模后第7d、14d、21d时用棉拭子检测大鼠足底缩足反射,记录、统计缩足次数并计算百分比。结果:1)采用中性蛋白酶和胰酶依次消化SD大鼠足底及须垫部位所取皮肤组织可得到较多MCs,以CK20做细胞免疫化学染色可见MCs呈阳性反应。2)实验中应用中性蛋白酶及胰酶双酶消化法可得到MCs,以Ham,s F-12培养基为基础培养基,加入20ng/ml bFGF可使MCs稳定增殖;qPCR结果示MCs中Piezo2 mRNA的表达量为:0.0270±0.0042;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测检测MCs上清液中降钙素基因相关肽(CGRP)在培养第2、4、6、8、10天浓度随培养时间的延长逐渐增加,培养第6d到8d时增加速率更快,间接提示默克尔细胞增殖情况。3)创面愈合方面,大体观察肿胀程度及炎性反应程度无明显区别,总愈合时间上应用MEBO的两组创面较其他实验组提前,A组~E组愈合时间分别为14.33±0.69天、16.44±0.86天、14.83±0.71天、17.44±0.98天、16.27±0.67天。在同时间点创面愈合率上,A组和C组优于其他对照组(P<0.05),到21d时各组创面均全部愈合。在缩足反射比较上,除E组外,A组较其他三组反射阈值更低、对刺激更敏感(P<0.05),提示默克尔细胞联合MEBO应用有促进大鼠足底创面神经再生的作用。4)创面新生皮肤免疫荧光染色显示示A组在神经纤维数量较多、排列有序,优于阴性对照或单一实验处理组,与阳性对照组(E组)相近。结论:1)中性蛋白酶及胰酶双酶消化法是获取大鼠MCs的有效方法,在加入bFGF的Ham,s F-12培养基的体系中培养的MCs大量增殖。2)MCs局部注射联合MEBO外用可缩短创面愈合时间、促进创面皮肤神经的再生。