目的:蛹拟青霉菌丝体Paecilomyces.Militaris是由蛹虫草C.militaris中分离蛹拟青霉,再通过人工培养得到菌丝体。蛹拟青霉菌丝体作为冬虫夏草的代用品已在中成药和保健食品中使用,但由于开发与认识的局限性,限制了蛹拟青霉菌丝体的使用范围[1]。本文筛选了镇静作用优良的菌株,进行了蛹虫草指纹图谱研究和分散片工艺研究,并对其分散片进行了质量评价,为扩大蛹拟青霉的应用提供了实验依据。方法和结果:1.镇静活性菌株筛选小鼠每天分别灌胃蛹虫草拟青霉菌丝体、蝙蝠蛾拟青霉菌丝体、兰坪蝉花虫草拟青霉菌丝体、蝉花虫草拟青霉菌丝体0.1 g/ml和0.2 g/ml和冬虫夏草(0.2g/ml)以及安定(0.004g/kg)。连续给予受试物7天后,进行戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验[2-3],以筛选镇静作用优良菌株。结果:蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和蛹虫草拟青霉菌丝体均有明显的诱导小鼠戊巴比妥钠的潜伏期缩短、延长了小鼠的睡眠的作用,同时发现蛹虫草拟青霉菌丝体的镇静作用与野生冬虫夏草和安定相近,蛹虫草拟青霉菌丝体中、高剂量组对戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间和入睡时间都具有显著的意义(p<0.01,p<0.05)。2.蛹虫草拟青霉菌丝体指纹图谱研究取蛹拟青霉菌丝体粉末约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入20%甲醇10ml,密塞,称重,超声处理90min,称重,用20%甲醇补足减失量,摇匀,4000r/min离心15min,取上清液,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得,以HPLC法对菌丝体测定,建立了蛹拟青霉菌丝体指纹图谱的色谱条件:Agilent C18(5μm,4.6×250mm)为色谱柱;以甲醇-水为流动相梯度洗脱;流速1.0ml/min;UV检测波长为260nm;柱温30℃;采集了10批蛹拟青霉菌丝体HPLC图谱,运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》,建立了对照指纹图谱,并以共有模式为参照,计算批次之间的相似度[4-5]。3.蛹虫草拟青霉菌丝体提取工艺研究对上述镇静活性最好的菌丝体进行醇提,以出膏率和腺苷的转移率为指标[6-7],优选了乙醇浓度、加醇量、提取时间三个因素对蛹虫草拟青霉菌丝体提取的工艺,并对工艺进行验证。4.蛹虫草拟青霉菌丝体分散片的成型工艺研究通过单因素实验筛选菌丝体醇提物分散片的处方组成。以片剂的外观形状、硬度、崩解时限为指标,分别考差了润滑剂、粘合剂、崩解剂的种类及用量[7-11]。结果优化工艺为:醇提干膏粉末用量37%,乳糖用量37%,崩解剂用量20%(pvpp10%,L-HPC10%),粘合剂HPMC10%,润滑剂硬脂酸镁2%,片重0.4g。5.蛹虫草拟青霉菌丝体分散片的质量评价参照《中国药典》2015版第四部附录对片剂项下的有关要求[12],对其外观性状、片重差异、崩解时限、含量测定等各项规定项目进行了考察[13]。含量测定结果:每1g蛹虫草拟青霉菌丝体分散片中含尿苷1.115mg、腺苷1.176mg。结论:通过以上实验研究发现,蛹拟青霉菌丝体镇静活性良好、来源质量可控、提取工艺稳定可行、质量评价合理可靠,将其制备为分散片具有良好的开发前景。