树突状细胞(dendritic cells,DCs)是最为重要的专职性抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC),其所诱生的CD8+T细胞应答是机体抗肿瘤和抗胞内微生物感染的重要效应细胞。我们前期的研究发现,乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁刺激可促进CD8+DCs介导的抗原交叉提呈,从而增强其抗肿瘤效应。甘露糖受体MR作为DCs表面最重要的模式识别受体之一,它所介导的抗原内吞是CD8+DCs介导抗原交叉提呈的关键步骤。文献报道,OVA负载能够促进MR的K48多聚泛素化从而促进抗原至内体的定位,我们前期的研究也发现,尼古丁刺激不仅上调了 MR的表达而且也促进了内吞抗原转运至内体。但截至到目前,我们尚不清楚,MR发生K48多聚泛素化修饰过程中关键的E3连接酶以及其在CD8+DCs介导抗原交叉提呈中的作用。为此,本课题首先以Real-time PCR、Western Blot筛选可能的针对MR的K48多聚泛素化修饰的关键E3连接酶;次以免疫共沉淀技术检测E3连接酶C-Cbl以及Cbl-c在内体中的定位以及与MR的相互作用情况;再以基因沉默结合免疫共沉淀技术检测C-Cbl以及Cbl-c基因沉默对MR的K48多聚泛素化修饰的影响;最后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测C-Cbl以及Cbl-c基因沉默对交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb形成的影响。结果显示:乙酰胆碱N型受体激动剂尼古丁刺激能够促进E3连接酶C-Cbl和Cbl-c基因水平和蛋白水平的表达;尼古丁刺激显著增强了 Cbl的磷酸化激活;尼古丁刺激不仅增加了 C-Cbl以及Cbl-c至内体的定位,而且促进了其与MR的相互作用;E3连接酶C-Cbl和Cbl-c基因沉默不仅逆转了尼古丁刺激对MR的K48多聚泛素化的增强作用,而且减弱了 CD8+DCs交叉提呈的能力。综上所述,本课题发现了 MR的K48多聚泛素化修饰过程中关键的E3连接酶,进而完善了尼古丁促进MR的K48多聚泛素化修饰从而增强CD8+DC交叉提呈的具体分子机制。