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目的:牙周炎是心血管疾病的独立危险因素,牙周感染会增加血管钙化的风险。牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)可促进大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)的异常增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性,对相关钙化基因ALP、核心结合因子αl(Cbfαl)、骨涎蛋白(BSP)和骨桥蛋白(OPN)均具有促表达作用。但体内环境复杂,Pg-LPS在体内情况下对VSMCs的作用尚待研究。利用Transwell小室建立的两种细胞的共培养模型可以更好地模拟体内微环境,本实验利用Transwell小室建立体外人牙周膜细胞(HPDLCs)和人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)共培养系统,初步探究Pg-LPS刺激时,对HPDLCs共培养条件下的HUASMCs增殖和ALP活性以及对其相关钙化基因mRNA(ALP、Cbfαl、BSP)表达的影响。方法:1.细胞培养:采用I型胶原酶+组织块法获得原代HPDLCs,HUASMCs原代购自美国ScienceCell公司,传代培养并鉴定HPDLCs和HUASMCs;利用Transwell小室建立HPDLCs-HUASMCs体外共培养系统。2.CCK-8法检测HUASMCs增殖:实验分4组以及各组处理情况:C组(单独正常培养 HUASMCs);C-P 组(HUASMCs+Pg-LPS);CO 组(HPDLCs-HUASMCs共培养)和CO-P组(HPDLCs-HUASMCs共培养+Pg-LPS)。实验所加Pg-LPS的浓度均为lμg/ml。各组细胞均培养48h后,采用CCK-8法和碱性磷酸酶试剂盒分别测定各组中HUASMCs的增殖和其ALP的活性。3.钙化诱导茜素红S染色及钙化结节定量分析:采用Pg-LPS和含维生素C、地塞米松、β-甘油磷酸钠的钙化诱导液诱导HUASMCs成骨分化。实验分8组以及各组处理情况:C组(单独正常培养HUASMCs);C-P组(单独培养HUASMCs+Pg-LPS);C-C组(单独培养HUASMCs钙化诱导);C-CP组(单独培养HUASMCs钙化诱导 + Pg-LPS);CO 组(HPDLCs-HUASMCs 共培养)；CO-P 组(HPDLCs-HUASMCs 共培养+Pg-LPS);CO-C 组(HUASMCs-PDLCs 共培养钙化诱导)和 CO-CP组(HUASMCs-PDLCs共培养钙化诱导+Pg-LPS)。作用21 d后使用茜素红S染钙化结节,并定量检测钙化结节。4.RealTimePCR检测钙化相关因子(ALP、Cbfαl、BSP等)的表达:实验分组及各组处理情况同方法3,培养48h后,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测Pg-LPS对各组HUASMCs中成骨分化相关基因ALP、Cbfαl和BSPmRNA表达的影响。结果:1.细胞培养:采用Ⅰ型胶原酶+组织块法成功培养出HPDLCs,并成功建立HPDLCs-HUASMCs共培养系统。2.HUASMCs的增殖:C-P组和CO-P组中HUASMCs的增殖和ALP活性分别强于C组和CO组;且共培养的CO-P组中HUASMCs的增殖和ALP活性强于单独培养的C-P组。3.茜素红S染色和结节定量结果表明:钙化诱导各组较普通培养各组钙化结节明显增多;且在不同培养条件下,Pg-LPS均促进钙化结节的形成;而共培养的CO-C组和CO-CP组钙化能力分别强于单独培养的C-C组和C-CP组。4.RT-PCR结果示:Cbfαl、ALP、BSP在钙化诱导组的表达分别明显高于普通培养组的;在含Pg-LPS的各组的表达显著高于不含Pg-LPS的各组;Pg-LPS或钙化诱导液以及两者同时存在的时候,共培养各组的钙化能力分别高于单独培养的各组。结论:Pg-LPS可能通过促进HUASMCs增殖增强、ALP活性和上调钙化相关基因(ALP、Cbfαl、BSP)的表达进而影响其钙化;且与HPDLCs共培养条件下对HUASMCs的钙化作用更强;提示牙周炎可能比单纯的炎症更能促进血管钙化的发生发展,牙周炎对心血管疾病的发生发展有一定的促进作用。