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目的从C6胶质瘤细胞系中分离培养胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)，并进行纯化鉴定从而获得可靠的GSCs细胞株；研究重组子pDsRed2-C1-PEX对GSCs生物学活性及微环境的影响。方法（1）采用全贴壁培养法培养C6胶质瘤细胞，无血清悬浮分离及单克隆培养纯化扩增GSCs，细胞免疫荧光化学染色鉴定GSCs。（2）脂质体介导pDsRed2-C1-PEX转染大鼠C6胶质瘤干细胞及荧光显微镜下观察转染荧光，RT-PCR鉴定PEX在GSCs的表达及检测PEX对血管生成相关因子（MMP-2mRNA、VEGFmRNA）表达的影响。（3） MTT法测定GSCs生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期。结果（1）成功分离并培养出GSCs，单克隆培养GSCs呈球状生长，不易吹散，折光性较强，细胞免疫荧光染色鉴定出肿瘤球表达CD133，其分化的子代细胞表达NSE或GFAP，分化细胞为与神经元或胶质细胞相似的肿瘤细胞。（2）成功瞬时转染，PEX在GSCs中高表达并且其对体外培养的GSCs的增殖有明显抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期显示：GSCs-PEX转染组细胞周期G0/G1期细胞百分数明显升高为81.10%，S期细胞百分数明显降低为12.04%，差异有统计学意义（P＜0.05）。（3） PEX在GSCs可高表达，转染组PEX的表达为空白组的2.0倍，为空载体组的1.8倍。转染组与其余两组比较差异有统计学意义（P <0.05），MMP-2和VEGFmRNA的表达则恰好相反，均是转染组表达减少，与空白组、空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论（1） C6胶质瘤细胞系中可分离培养出GSCs，PEX基因可在GSCs中表达，并对GSCs的生长增殖有明显抑制作用。（2） PEX基因对GSCs中MMP-2及VEGF的表达有明显的下调作用，可以推测PEX基因可能是通过抑制GSCs分泌MMPs的途径或者是抑制血管源性的GSCs增殖途径而影响其生长。从而将基因治疗与GSCs这个靶点结合起来，精确靶向GSCs为抗脑胶质瘤治疗提供有效的手段。