真菌提取物对旋毛虫病治疗的实验研究

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目的:探讨真菌提取物在不同浓度下,对旋毛虫病鼠驱虫效果、抑杀虫体作用环节、对虫体生物活性的影响。同时,观察真菌提取物在对旋毛虫病鼠进行治疗前后,对宿主肠道黏膜免疫活性的影响。方法:首先应用计数法,对旋毛虫囊包计数。用口饲法感染小鼠,建立旋毛虫病动物模型。将感染阳性小鼠随机分为4个组:三个不同浓度的实验治疗组(A1:50mg/kg;A2:100mg/kg;A3:200mg/kg),一个阳性模型对照组(Y组)。同时,设立一个阴性正常对照组(Z组)。每组鼠数6只。实验治疗组小鼠在感染旋毛虫后的第5天,给予不同浓度药物进行3天的治疗,并于停药后2天处死所有小鼠。同时,将阳性模型对照组(Y组)和阴性正常对照组(Z组)的小鼠亦处死。将所有收集的小鼠肠道回盲部旋毛虫成虫,计数,计算虫体负荷和减虫率。从各组实验组随机取部分旋毛虫成虫,用卡红染料进行染色和采用透射电镜检查,以观察不同实验组鼠应用不同浓度药物作用后,对其体内旋毛虫成虫外部形态、内部结构、发育状况的影响,以及分析该药抑杀虫体的作用机制和部位。另外,取各实验组小鼠用药前后部分回肠肠壁组织、回肠和回盲部肠黏膜分泌物,分别做小鼠肠黏膜固有层FAS蛋白和SIgA分泌水平的测定和观察。上述各组所得数据均进行统计学比对分析。结果:(一)药物驱虫效果的观察A1、A2和A3三个药物治疗组的成虫负荷和减虫率分别为57.1%、78.1%和96.2%。这三个治疗组成虫负荷和减虫率效果与阳性模型对照组(Y组)相比较,经统计学处理发现具有显著性差异(P<0.05);A1、A2、A3三个用药治疗组之间的成虫负荷和减虫率效果比较亦具有显著性差异(P<0.05),其中以A3治疗组驱虫效果最好。(二)驱虫药物对虫体作用的观察从A1、A2和A3三个药物治疗组和阳性模型对照组(Y组)小鼠肠道收集的成虫,用形态学分析测量软件在光镜下测量虫体平均大小:A1组虫体长宽为1278.95±68.89×49.97±8.83;A2组虫体长宽为1213.45±88.04×38.91±5.76;A3组虫体长宽为1122.34±42.88×33.80±6.22;Y组组虫体长宽为1305.55±53.90×57.47±5.76。4个组组间和组内进行统计学比较分析无明显的差异(P>0.05)。但在光镜下进行观察,这4个组组间和组内虫体由于杀虫药物的作用和影响,呈现虫体变小或发育不均等状况。(三)药物作用虫体电镜下的观察阳性模型对照组所获旋毛虫表皮完整、光滑、无缺。成虫肠上皮细胞顶端的微绒毛结构完整,排列规则整齐,形成刷状缘。由于真菌提取物的药物作用:A1、A2、A3组的成虫表皮均出现粗糙,凹凸不平的现象。其中A1组成虫肠道上皮顶端的微绒毛结构完整性遭到破坏,排列不规整,稀疏且长短不一,部分肠微绒毛开始出现倒伏;A2组成虫肠微绒毛不仅出现倒伏,且微绒毛变短变小,生长受限。A3组成虫肠微绒毛遭到严重的破坏,出现彼此融合或缺损等严重的病理变化。(四)小鼠肠黏膜固有层FAS蛋白的表达所有实验小鼠肠黏膜固有层FAS蛋白的表达是采用免疫组织化学染色,然后经灰度分析软件分析,结果如下:Y组小鼠肠黏膜固有层FAS蛋白表达的平均光密度值为0.2195±0.0160,相较于Z组的0.1099±0.0042明显升高(P<0.05)。在实验组小鼠用药后,并随着用药浓度的增加,FAS蛋白的表达水平逐渐下降,其中A1:0.1541±0.0055;A2:0.1268±0.0074;A3:0.0944±0.0046,三个组间小鼠FAS蛋白的表达水平进行统计学分析呈现出显著性差异(P<0.05)。A3组小鼠在应用大剂量杀虫药物后,小鼠FAS蛋白的表达水平回复,并与正常阴性对照Z组水平接近。(五)小鼠SIgA分泌的水平所有实验小鼠肠黏膜SIgA分泌的水平经检测,结果如下:Y组宿主小肠液SIgA分泌量为897.2473±20.3669,相较于Z组的79.0611±4.9235明显升高(P<0.05)。A1、A2和A3三个药物治疗组小鼠在用药后,并伴随着用药浓度的增加,肠黏膜SIgA的分泌量逐渐下降,其中A1:140.0946±14.5452;A2:100.1102±7.5841;A3:63.8602±8.7385。三个用药组间进行统计学分析也有明显的差异(P<0.05)。同样A3组小鼠在应用大剂量杀虫药物后,小肠黏膜SIgA的分泌量回复,并与正常阴性对照Z组水平接近。结论:(一)真菌提取物对旋毛虫成虫有较好的抑杀作用,并对旋毛虫成虫体表和其消化系统产生明显破坏作用。抑杀虫体作用机制可能的原因是因为该药抑制旋毛虫NFRD的生物活性,引发能量代谢紊乱,最终导致虫体因能量耗竭逐渐死亡,并排出体外。真菌提取物最佳的杀虫药物浓度是200mg/kg。(二)真菌提取物通过直接或间接方式下调肠黏膜固有层FAS蛋白的表达,修复由于旋毛虫感染损害引发肠黏膜上皮细胞出现大量程序死亡的病理生理学改变。(三)真菌提取物可以通过直接或间接方式减低肠黏膜SIgA的分泌量,刺激宿主产生适应性免疫,同时协助宿主免疫应答,以达到清除旋毛虫在肠道寄居和定植,以及防御旋毛虫感染的目的。通过上述实验结果表明,真菌提取物可以作为一种新型抗寄生虫药物,在抑杀旋毛虫和治疗旋毛虫病等方面具有较好的疗效,对其进一步深入研究和开发利用将有助于我国医药科技自主产业的发展,并具有很好的市场开发前景。
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