鹅源抗小鹅瘟高免血清F(ab’)2片段的制备及初步应用

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小鹅瘟(Gosling plague, GP)是由鹅细小病毒(Goose Parvovirus, GPV)引起的雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、败血性传染病,主要侵害3-20日龄的雏鹅,具有病程短促、传染性强、传播快、死亡率高等特点,是目前危害养鹅业健康发展的最严重的传染病之一。1956年方定一等在扬州首先发现该病,并于1961年分离到第一株小鹅瘟病毒。1965年欧洲等一些国家也相继有了该病的报道。1987年李茂祥等测定了扬州株GPV的部分理化特性。目前,该病每年都有不同程度的流行,给养鹅业造成了重大的经济损失,引起国内外学者的广泛关注。当前小鹅瘟的预防和治疗主要依靠弱毒疫苗、灭活苗、高免血清和卵黄抗体。高免血清中含有中和抗体,可在病毒入侵机体时发挥特异性、快速的中和作用,能够起到很好的紧急预防和治疗的作用。目前我国现行血清制品,工艺上的粗糙,产品纯度不高是产品的一个主要不足原因,因此利用蛋白质的各种特性对目的蛋白和非目的蛋白加以区分,运用更先进的科技技术方法,使血清制品达到更高的标准,是动物源血清制品发展的必经之路。高免血清分为同源和异源两类,2009年王文强等制备了抗体效价为1:8的抗小鹅瘟羊源高免血清,免疫保护率达到95%。异源血清对鹅是一种抗原,易产生排斥反应,产生的抗体中含有大量异源抗体。在异源抗体的制备过程中,病毒无法在宿主体内增殖,导致抗体效价不高,影响免疫效果。用同源高免血清紧急预防和治疗小鹅瘟成为一种必然的趋势。本实验应用鸭胚大量扩增GPV,收集尿囊液,经离心去除杂质后,加入甲醛灭活制备抗原,免疫成年鹅。当琼脂扩散效价达到1:32时,枕静脉窦采血,分离制备鹅源抗小鹅瘟血浆。分别经饱和硫酸铵粗提,DEAE Sephadex-A50精提抗血清,得到鹅源抗小鹅瘟抗体。之后经胃蛋白酶处理得到F(ab’)2片段和Fc段,利用Sephadex SP FF层析柱去除Fc段提纯F(ab’)2片段,使血清制品达到更高的标准。结果表明,精制后的F(ab’)2抗原结合片段的中和效价为1:1280,实验室的紧急预防和治疗试验中的平均存活率均为88.9%,均高于市售高免血清;在对长春某养殖户的发病雏鹅进行确诊后进行临床治疗试验,得到了很好的治愈率。
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