目的随着经济的发展和生活水平的提高,人们的健康意识不断增强,药物不良反应越来越受到重视,如何更加安全合理用药成为当今社会关注的焦点。西药具有见效快、疗效显著等优点而被广泛应用于临床。然而,西药存在潜在不良反应,如西药治疗高脂血症时,可能导致肝功能异常、横纹肌综合症、高血糖等。相较于西药而言,中药安全性较高,使得越来越多的人们选择中药进行防治,且更加安全、有效、合理的药食同源类药材备受关注。中医认为,高脂血症乃本虚标实之症,以痰瘀为标,正虚为本;脾失健运、肝失疏泄、肾失气化、三焦失利所致,治宜祛痰化湿、活血化瘀、滋补肝肾、温肾健脾四法。方中山楂甘酸微温,归脾胃肝经,消食健胃,化脂降浊,行气散瘀。荷叶苦平,归肝脾胃经,善于解暑化湿,升发清阳。两者相伍,则肝气得疏,脾升胃降,湿浊得利,淤血得消。稍佐枸杞以平补肝肾。三药合用,降中有升,泻中有补,痰湿得化,淤血得消,脾肝肾并调而效。且方中三药,性味平和,不温不燥,不寒不热,为药食共用之品,适于长期服用而无偏性之弊。本课题以药食同源的山楂、荷叶和枸杞子为原料,通过制备工艺、质量标准的研究及药效评价,旨在研制一款具有中医特色,安全、绿色、适宜人群更广的降脂颗粒。方法1.采用超声辅助乙醇提法考察提取乙醇体积分数、料液比、超声时间对山楂、荷叶提取的影响,利用正交试验优化山楂、荷叶提取工艺,基于最优工艺获得山楂、荷叶的乙醇提取物,应用亚硝酸钠硝酸铝法测定提取物中总黄酮含量。枸杞子采用传统的水提醇沉法进行多糖的提取,采用苯酚浓硫酸法测定多糖的含量。2.采用成型率、溶化性作为评价指标,对赋型剂种类、赋型剂用量、赋型剂混合比例、浸膏密度进行初步考察,筛选出各组分的最佳配方范围。采用D-最优混料设计优化成型工艺,评价指标为成型率、溶化率、吸湿性、感官评价,筛选出最佳处方。3.通过胆固醇吸附、胆固醇酯酶抑制、胆酸盐结合、胰脂肪酶抑制作用的测定,对山荷降脂颗粒体外降脂活性进行评价。4.采用网络药理学的方法对山荷降脂颗粒组方中有效活性成分及其对应的靶点进行收集整理。通过Gene Cards数据库、Dis Ge NET数据库、Drug Bank数据库、OMIM数据库获取高脂血症疾病的相关靶点,利用Venny2.1取两者交集靶点,通过STRING构建PPI网络。利用DAVID对GO和KEGG进行通路富集分析。通过Cytoscape3.7.1构建成分-靶点-通路网络图,最后通过Autodock完成分子对接进行验证。5.建立山荷降脂颗粒的质量标准草案。通过薄层色谱法对山荷降脂颗粒中山楂、枸杞子、荷叶进行鉴别;按药典颗粒剂项下相关规定,对山荷降脂颗粒水分、外观均匀度、溶化性、吸湿性等项目进行常规检查;建立紫外可见分光光度法测定山荷降脂颗粒中药效成分总黄酮的含量。结果1.山楂、荷叶单因素实验研究结果显示:乙醇体积分数为70%,料液比为1:30,超声时间为2 h时山楂、荷叶的提取物中总黄酮含量最高。基于单因素研究结果,综合考虑各因素影响,采用正交试验优化提取工艺,研究结果显示,乙醇体积分数为50%,料液比1:30,超声时间1.5 h时提取效果最佳,山楂、荷叶乙醇提取物中总黄酮含量为120.41 mg/g。枸杞子经苯酚-浓硫酸法测定,枸杞多糖中多糖含量为38.59%。2.初步考察山荷降脂颗粒成型工艺参数范围,研究结果显示,主药占比为:18%~24%,乳糖占比为:40%~60%,甘露醇占比为:10%~30%,阿斯巴甜占比为:0.1%~0.3%时均可成型。基于以上参数,采用D-最优混料设计得最优处方比为:主药质量分数为:21.929%,乳糖的质量分数为:42.191%,甘露醇的质量分数为:26.859%,阿斯巴甜的质量分数为:0.225%。3.山荷降脂颗粒体外降脂活性实验研究表明,山荷颗粒在p H=2,对胆固醇的吸附量为6.05 mg/g,在p H=7时,对胆固醇的吸附量为33.30 mg/g;当样品浓度达到500 mg/m L时,对胆固醇酯酶的抑制率达到87.19%。在同一条件下,对甘氨胆酸钠的抑制率为64.99%,对牛磺胆酸钠的抑制率为47.70%;山荷降脂颗粒对胰脂肪酶活性的抑制率达到了75.83%。以上研究结果表明,山荷降脂颗粒具有明显的体外降脂作用。4.基于网络药理学和分子对接技术研究山荷降脂颗粒的降脂机理,结果显示,基于组方中56种有效活性成分,共获得PPARA、HSD11B1、EGFR、CASP3、KDR、ESR1、IGF1、PTPN1、NOS3等66个共有靶点,通过作用于Metabolic pathways、PPAR signaling pathway、Insulin resistance和Steroid hormone biosynthesis等通路参与调节血脂异常。据此推断,山荷降脂颗粒治疗高脂血症的作用机制可能激活PPAR signaling pathway通路PPAR-α受体,激活脂质分解代谢,进而调节体内葡萄糖和脂质代谢平衡。山荷降脂颗粒关键活性成分与核心靶点的结合潜能较好,表现出与西药同等的结合潜能。5.质量标准研究结果显示,采用薄层色谱法可鉴别山荷降脂颗粒中的山楂、荷叶和枸杞子;对山荷降脂颗粒的常规检查研究结果显示,制备的颗粒均符合药典规定;采用紫外分光光度法测定山荷降脂颗粒中总黄酮含量研究结果显示,其总黄酮含量为29.71 mg/g。结论本研究研制了山荷降脂颗粒,并制定了其质量标准草案。体外降脂活性评价研究结果表明该颗粒具有较好的降脂活性,其降脂活性可能通过激活PPAR signaling pathway通路PPAR-ɑ受体,激活脂质分解代谢,进而调节体内葡萄糖和脂质代谢平衡。