不利温度对烟粉虱共生菌的影响

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烟粉虱Bemisia tabaci (Hemiptera:Aleyrodidae)属于半翅目粉虱科,是一个包含至少36个不同隐种的物种复合体,其中Middle East-Asia Minor1(MEAM1)与Mediterranean (MED)两隐种为重要的入侵性害虫。烟粉虱共生菌具有多样性,烟粉虱中已发现共生菌包括原生菌“Candidatus Portiera aleyrodidarum",次生菌"Candidatus Hamiltonella defensa", Rickettsia spp., Arsenophonus spp.,"Candidatus Cardinium hertigii", Wolbachia spp.,"Candidatus Fritschea bemisiae","Candidatus Hemipteriphilus asiaticus"。原生菌为烟粉虱提供必需的营养物质,是烟粉虱正常生存必不可少的,次生菌并非必需的,但也具有重要的功能。所有隐种都有原生共生菌‘’Ca. Portiera aleyrodidarum",不同隐种的次生菌不尽相同,每个隐种可能含有一种或几种次生共生菌。本研究所使用的烟粉虱,MEAM.1含有‘’Ca. Portiera aleyrodidarum"、"Ca. Hamiltonella defensa"和Rickettsia sp.,MED含有"Ca. Portiera aleyrodidarum"和‘’Ca. Hamiltonella defensa"。两隐种中的‘’Ca. Portiera aleyrodidarum’‘和‘’Ca. Hamiltonella defensa"都位于烟粉虱的含菌体细胞内,而MEAM1中的Rickettsia sp则位于烟粉虱体腔各处。将MEAM1和MED两种烟粉虱分别置于不利高低温下,测定各种共生菌的反应和烟粉虱的死亡率。在5℃、10℃低温和35℃、40℃高温下24小时后,通过普通PCR检测各共生菌的感染率都没有显著差异。通过定量PCR检测发现,在40℃下24小时后,"Ca. Hamiltonella defensa"的含量显著降低,其它共生菌的含量并未受显著影响。其后将两种烟粉虱置于40℃下1-5天,’Ca. Hamiltonella defensa"的含量在第一天时显著下降,并且随着处理时间的延长,下降幅度不断增加。与’Ca. Hamiltonella defensa’相比,’Ca. Portiera aleyrodidarum"的含量在40℃下处理1天时下降不明显,而3-5天时,显著下降。在40℃下1-5天内,Rickettsia sp的含量有一定的波动但并未受显著影响。通过荧光原位杂交检测共生菌的结果与定量PCR结果一致。与此同时,烟粉虱的死亡率也随着高温的持续而显著增加。同一寄主昆虫内的不同共生菌在不利温度下的不同反应,暗示它们之间可能存在着复杂的互作关系,这也说明充分考虑寄主昆虫体内整个共生菌群落的重要性。将烟粉虱置于35℃高温下持续饲养,对其共生菌的含量及感染率都会产生不利影响。在35℃下5-20天内,MEAM1烟粉虱成虫的‘’Ca. Portiera aleyrodidarum"和‘’Ca. Hamiltonella defensa"感染率都在不断下降,30天时F1代成虫中两种共生菌感染率也显著下降;而另一共生菌Rickettsia sp的感染率并未受明显影响。通过定量PCR对MEAM1烟粉虱的F1成虫的共生菌的含量检测发现,‘’Ca. Portiera aleyrodidarum"和‘’Ca. Hamiltonella defensa"的含量下降极其明显,下降幅度达99%以上,Rickettsia sp的含量也明显下降,但幅度远不如前两者,雌性和雄性中该菌的相对含量分别为25℃种群的17.4%和65.8%,且雄性种群未到达显著水平。在35℃下30天时,MED烟粉虱的F1代成虫的共生菌"Ca. Portiera aleyrodidarum"和"Ca. Hamiltonella defensa"的含量下降幅度达到或接近99%。荧光原位杂交对35℃下饲养至4龄的若虫检测的结果与定量PCR对成虫检测的结果一致。此外,在35℃下,MEAM1与MED烟粉虱的含菌体及含菌体细胞也都受到不利影响。在25℃下,烟粉虱1-4龄若虫期都有两个含菌体,而35℃度下1-4龄若虫的含有两个含菌体的个体比例为25-60%。在35℃下,烟粉虱含菌体细胞的分化受到抑制,3龄、4龄和成虫的含菌体细胞数量都显著减少。在35℃下,4龄若虫和F1代成虫腹部的含菌体不易被白色透射光穿透,呈现暗黑色,而在25℃下,两者的含菌体皆可被白色透射光穿透。MEAM1与MED烟粉虱都不能够在35。C下续代生存,将35℃下的F1成虫转入25℃时,其产卵量显著下降,且所产的卵都不能孵化。在高温下,烟粉虱中含菌体细胞内的共生菌‘’Ca. Portiera aleyrodidarum"和’Ca. Hamiltonella defensa"比胞外的共生菌Rickettsia sp更易受到不利影响,出现这种现象的可能原因除了微生物种类的特异性之外,含菌体及含菌体细胞也可能起作用。高温下,烟粉虱共生菌包括原生菌显著下降甚至消失,同时烟粉虱生殖也受到影响,说明两者可能存在一定的关联。
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