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目的:建立膀胱癌T24细胞的三维(three-dimensional,3D)细胞培养模型;运用膀胱癌T24细胞的3D细胞培养模型研究细胞外微环境在膀胱癌细胞表型形成中的作用,以及研究3D细胞培养模型中T24细胞Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及黏附因子E-cadherin表达的变化,从而在3D细胞培养模型中探讨膀胱癌T24细胞黏附、侵袭和迁移方面的分子机制。方法:先对膀胱癌T24细胞进行常规的二维(two-dimensional,2D)细胞培养,消化2D培养条件下生长状况良好的T24细胞,用被RPMI1640培养基稀释成不同比例的完全融化的Matrigel基质胶重悬细胞,以及直接用融化的Matrigel胶重悬细胞或接种T24细胞于Matrigel胶表面进行三维细胞培养,探索并构建膀胱癌T24细胞3D培养模型。构建3D培养模型成功后用免疫印记实验检测2D和3D两种培养条件下Eph A2、MMPs(MMP2和MMP9)以及粘附因子E-cadherin蛋白的表达。Transwell侵袭实验检测两种不同培养条件下膀胱癌T24细胞的侵袭力。结果:1.T24细胞不同条件下三维培养情况按不同的比例的培养基稀释的Matrigel胶培养条件下无法建立T24细胞的三维细胞培养模型;细胞接种于Matrigel胶表面只有贴近Matrigel胶表面的细胞才能形成细胞的3D生长;用Matrigel胶重悬细胞的培养情况下,在培养过程中看见逐渐形成的无极性球状细胞克隆,并且伴随着培养时间的延长细胞团表面逐渐长出一些丝状样的伪足;运用低温下融化的Matrigel胶直接重悬膀胱癌T24细胞的培养方法能成功构建T24细胞的3D培养模型。2、3D和2D条件下T24细胞Eph A2分子,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin蛋白的表达水平与侵袭力3D培养条件下膀胱癌T24细胞中Eph A2,MMPs(MMP2和MMP9)和E-cadherin的表达上调,与2D培养模型各蛋白表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3D培养条件下膀胱癌T24细胞侵袭潜能较2D培养条件下增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、应用再造细胞外基质Matrigel胶可以构建膀胱癌T24细胞的3D细胞培养模型。2、膀胱癌T24细胞在3D细胞培养条件下可能通过上调Eph A2、基质金属蛋白酶MMPs(MMP2和MMP9)以及E-cadherin的表达从而提高膀胱癌T24细胞黏附和侵袭的能力。