目的：胶质瘤的主动免疫治疗(active immunotherapy)已成为胶质瘤治疗研究的热点，而免疫反应首先是由抗原递呈细胞(antigen-presenting cell, APC)捕获抗原，经其加工、处理后将抗原信息传递给淋巴细胞，从而诱发特异性免疫应答。树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内功能最强的专职抗原递呈细胞。因此本实验通过培养树突状细胞制备肿瘤疫苗，进一步探讨胶质瘤瘤苗体外的抗肿瘤作用。方法：将体重100-150g雌性SD大鼠脱颈处死，在无菌条件下取双侧股骨和胫骨，剪除两端软骨组织达骨髓腔，用培养液充分冲洗骨髓腔，200目尼龙网过滤后离心，弃上清。去除红细胞。用PBS及无血清IMDM培养液洗涤，弃上清。加入含20%胎牛血清IMDM完全培养液培养。第8天收获成熟的树突状细胞。扫描电镜观察、流式细胞免疫学检测树突状细胞。采用冻融法制备肿瘤抗原。取对数生长期的C6肿瘤细胞，消化、吹打均匀并计数，移入冻存管，冻存于-70℃低温冰箱。次日，将其置于室温下融化,而后再次放入-70℃低温冰箱，反复冻融4次，离心30分钟，吸取上清液，-70℃保存。在树突状细胞培养皿中加入冻融抗原培养48小时。将20只SD雌性大鼠随机分为4组，每组5只动物：（1）C6肿瘤疫苗1组：将C6肿瘤抗原致敏的树突状细胞连续3周每周1次注入每只动物尾静脉，第3次注射后1周进行实验。（2）C6肿瘤疫苗2组：将C6肿瘤疫苗<WP=4>致敏的树突状细胞注入每只动物尾静脉，注射后1周进行实验。（3）树突状细胞组：将培养8天的树突状细胞连续3周每周1次注入每只动物尾静脉，第3次注射后1周进行实验。（4）对照组：每次每只动物尾静脉注射生理盐水1ml，每周一次，连续3周，第3次注射后1周进行实验。无菌条件下取出实验动物脾脏，洗去血迹，剪去脂肪及筋膜组织，于200目钢网上研磨组织，将组织细胞悬液置于淋巴细胞分离液上，离心，获取淋巴细胞。MTT法检测淋巴细胞杀伤活性，计算杀伤效率。结果：倒置显微镜下第1天可见髓单核细胞及少量的幼稚红细胞；第3天换液后红细胞成份消失，髓单核细胞明显增加，细胞已贴壁；培养的大鼠骨髓细胞第5天出现树突样细胞；第7、8天可见到大量有长的细胞突起的树突状细胞。扫描电镜观察可见未成熟树突状细胞体积较小，圆形或椭圆形，表面有少量细胞突起；成熟树突状细胞为圆形或椭圆形，表面有大量细胞突起，其突起末端又有细小的分支。流式细胞学检查显示OX62表达阳性率为90.39%,OX6表达阳性率为85.31%。计算各实验组、不同效靶比的OD值，应用SPSS软件进行统计学处理，在C6肿瘤疫苗1组的各效靶比的OD值之间有统计学差异(p<0.01)，其他各组内不同效靶比的OD值之间只有10：1与2.5：1之间有统计学差异(p<0.01)。在不同实验组的相同效靶比之间进行比较，C6肿瘤疫苗1组、C6肿瘤疫苗2组与其他各组之间有统计学差异(p<0.01)，树突状细胞组与对照组之间无统计学差异(p>.01)。结论：提取大鼠骨髓细胞，在含有GM-CSF和IL-4的<WP=5>完全培养基中可培养出具有高度免疫活性的树突状细胞。树突状细胞摄取肿瘤抗原后，可激发大鼠体内的肿瘤特异性免疫反应，明显增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。将成熟的树突状细胞注入大鼠体内后，体内淋巴细胞抗肿瘤活性未见明显增强。一次向大鼠体内注入树突状细胞肿瘤疫苗，体内淋巴细胞抗肿瘤活性稍有增强；多次向体内注入树突状细胞肿瘤疫苗，体内淋巴细胞抗肿瘤活性明显增强。