目的:二甲双胍是2型糖尿病治疗的一线药物,近年来因被发现具有抗肿瘤作用而成为研究的热点。塞来昔布是选择性抑制环氧化酶-2（COX-2）的非甾体抗炎镇痛药,COX-2的过表达被大量证实与促进肿瘤的发生发展有关。本研究拟探讨二甲双胍联合塞来昔布对人肝癌细胞HepG2和Huh7增殖、侵袭和迁移的影响,并初步研究其作用机制,为其在临床应用于抗肿瘤辅助药物提供实验室依据。方法:1.将肝癌细胞HepG2和Huh7分为对照组、二甲双胍组、塞来昔布组和联合用药组,根据实验要求分别进行培养。利用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;CCK-8法检测细胞增殖情况,并采用Chou-Talalay法计算联合用药指数（combination index,CI）。2.利用划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测AMPK、PI3K、Akt、m TOR蛋白表达情况。3.选择4周龄雄性裸鼠16只,将肝癌细胞Huh7混悬于PBS溶液制备成密度为5*10~7/ml的细胞悬液,用1ml一次性无菌注射器抽取200μl皮下注射于裸鼠左侧背部肩胛处,建立移植瘤动物模型。9天后当裸鼠皮下移植瘤体积>100mm~3时即建模成功,将所有荷瘤裸鼠随机分为对照组（生理盐水）,二甲双胍组（250mg/kg）,塞来昔布组（3mg/kg）和联合用药组（250mg/kg+3mg/kg）,每组各4只,以3天/次的频率经尾静脉注射给药,并记录裸鼠的体重和成瘤大小。在第43天处死裸鼠,分离皮下肿瘤,用4%多聚甲醛固定液固定24小时后包埋制成蜡块,通过免疫组织化学染色观察Ki-67表达情况,并用TUNEL检测法检测细胞凋亡情况。4.将肝癌细胞HepG2和Huh7分为对照组、二甲双胍组、塞来昔布组和联合用药组培养48小时后,基于Illumina测序平台进行转录组测序（m RNA）,分析各组间基因表达差异并进行筛选。利用q PCR验证差异基因MT1B、MT1E、MT1F、MT1G、MT1H、MT1M在表达趋势是否与测序结果一致。结果:1.Hoechst33258染色结果显示,与对照组相比,二甲双胍和塞来昔布作用于HepG2和Huh7细胞后,细胞逐渐圆缩,细胞核崩解,凋亡细胞增多,细胞增殖速度降低。CCK-8结果显示,二甲双胍和塞来昔布均能抑制HepG2及Huh7细胞的增殖,并且作用强度呈时间-浓度依赖性,其中二甲双胍对HepG2和Huh7细胞48小时的IC50分别为80mmol/L和25mmol/L,塞来昔布对HepG2和Huh7细胞48小时的IC50分别为25μmol/L和50μmol/L;双药联合用药时对细胞增殖抑制作用较单药时更明显,在48小时的IC50为HepG2:40mmol/L+12.5μmol/L,Huh7:6.25mmol/L+12.5μmol/L。通过Chou-Talalay联合指数法计算得出二甲双胍与塞来昔布存在协同作用,其在HepG2的CI值为0.65,在Huh7的CI值为0.27。2.划痕实验结果显示,二甲双胍和塞来昔布作用后细胞迁移能力明显下降（P<0.05）,联合用药效果更为显著。Transwell侵袭小室结果显示,单药用药时HepG2和Huh7细胞侵袭能力降低,在联合用药时侵袭能力受显著抑制（P<0.05）。WB结果显示,联合用药组HepG2细胞内AKT、AMPK、m TOR表达水平呈下降趋势,PI3K表达水平先下降,后上升;Huh7细胞内AKT、AMPK、PI3K、m TOR表达水平均呈下降趋势。3.二甲双胍和塞来昔布都能抑制裸鼠皮下肿瘤生长,联合用药时抑制效果显著。免疫组化结果显示Ki-67在联合用药组阳性率最低,TUNEL检测结果显示联合用药组细胞凋亡阳性率最高。4.转录组测序结果显示,联合用药时MT1B、MT1E、MT1F、MT1G、MT1H、MT1M基因表达明显上调（P<0.001）。q PCR验证结果与测序结果趋势相符。结论:体外细胞实验表明二甲双胍可协同塞来昔布增强对HepG2和Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。体内动物实验表明二甲双胍联合塞来昔布可以增强对裸鼠皮下成瘤的抑制作用。两药之间存在协同作用,可能与m TOR信号通路的抑制和MTs蛋白的激活有关。