HCV感染是当前危害人类健康的重要传染病。其体外培养尚未成功，至今尚无满意的感染模型，这极大的限制了HCV的研究及丙型肝炎的防治工作。构建并包装表达HCV结构基因的复制缺陷型腺病毒载体，在丙型肝炎的防治和HCV的研究中具有重要意义。 HCV的感染呈世界范围性，其致病常引起持续感染，且HCV的慢性感染与肝硬化及肝癌明显相关。至今尚无理想的预防和治疗措施。所以，寻找新的抗病毒途径，预防和清除HCV持续感染很有必要。T细胞疫苗作为一种防治HCV感染的新途径，正在受到人们的重视。探讨防治HCV感染的T细胞疫苗的制备方法及其在体内外对HCV的清除作用，对HCV感染的研究及防治也具有现实意义。 本研究利用分子克隆技术，构建了三种HCV结构蛋白腺病毒载体穿梭质粒，并以此为基础包装、筛选和鉴定了三种HCV结构蛋白腺病毒表达载体，选择并合成了HCV结构基因区5条CTL表位多肽，并以此诱导了5种HCV特异性CTL，并对其进行了体内外的实验测定。此外，我们还探讨了诱导前免疫致敏对T细胞疫苗活性的影响，并比较了HCV腺病毒载体和质粒载体在此免疫致敏功能方面的差异。我们还将T细胞疫苗与DNA疫苗在体内对HCV移植瘤的抑制作用进行了比较，探讨它们对HCV感染的保 第四军医大学博上学位论文 护和治疗作用的差异。 结论如下： 1．构建了3种HCV结构基因腺病毒载休穿梭质粒pAd．HCV（、 pAd．HCV－Cm手 pAd．HCV－CE EZ，经双酶切、PCR和坝序鉴定，它们 分 另IJ插入了 HCV C、C＋EI和 C＋EI＋EZ基因。＊ 〕将构建的 3种穿梭质粒与腺病毒基囚纲质粒 pJNll7共转染 293细胞， 通过土斑技术包装、筛选了三种 ＊＊V 纪构蛋日腺病毒天达载体 pAdHC＼＊C、pAdHCV－CEI耳 pAd．HCV－CEIEZ，经鉴定具有较好的感染 性，能较好的表达插入的HCV结构蛋白或融合结构蛋臼，与质粒DNA载 体相比，腺病毒载体具有更好的免疫效果，可望发展成为抗HCV感染的腺 病毒载体疫苗。 3．选择并合成了可与 H工‘分于结合的 5条 HCV结构基回区 CTL表位 多肽，建立了体夕「特异性CTL的诱导、增）rt的力法，诱导产生了了5种HCV 特异性CTL。 4．在诱导T细胞疫苗之前，用＊＊V腺炳毒载体或质粒载体讨小鼠进 厅免疫致敏，可以明显提高T细胞疫苗的活性；其中腺病毒载体的免疫致 敏效果要明显好于质粒载体。 5．将诱导的5种＊＊V特异性C＊L，在体外进了丁特异性杀伤实验，证一 实，出n、P3和 P4三条多肽诱导的脾纠＊泡含较高比例的 CD。＋纠1巾d，叫－产 上较好的CTL杀伤活性，可以用作T细胞疫苗进fi体内抗HCV实验。 6．建立了HCV结构基囚体外细胞转染系SPyo－NCV，爿。以此细胞系 建立了皮下移植瘤 HCV小鼠模型，经免疫组化叶大，SPZ／0－HCV细胞及其 移植瘤组织内均有HCV结构蛋白的表达。 7．将诱导的solkHCV特异性CTL，以T纠1）地疫苗的形式免疫皮下移 仙册NCV小鼠栓型，证丈，山PI、n和N三条多肌诱导的T纠1胞疫析对 6 父四军医大学阵土学位沦文 ＋1（V｛＄趴W人叫卜的抑制作川。 8．将3种丁细胞疫苗与表达＊＊V结构基因的质粒＊＊A疫苗在＊＊v 移他瘤小鼠捎型内进行治疗对比，发现djJ者明显忧于后者，提示，T细胞疫 祈在NCV感染的防治研究中可能具有较奸的发展汕景。