微生物转化制备手性醇

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本文利用微生物转化3-二甲基氨基-1-(噻吩基)-1-丙酮(简称DKTP)制备盐酸度洛西汀的重要中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2噻吩基)丙胺[简称(S)-DHTP]。本研究从土壤中筛选出以DKTP为底物转化制备盐酸度洛西汀的重要中间(S)-DHTP手性醇的菌株,并对筛选的菌株进行形态学及生理生化鉴定,优化了菌株的转化条件,在此基础上通过减压蒸馏方法及结晶纯化方法提高产物的产率及对映体过量值,成功地制备了(S)-DHTP产物,建立含噻吩基的转化模型。首先,采用与底物结构相似的苯乙酮为唯一的碳源从土壤中筛选微生物。将筛选出的微生物进行底物转化分析,得到一株高效转化DKTP为(S)-DHTP的菌株#17。通过形态特征和生理生化实验初步鉴定该菌株属于酿酒酵母菌(Saccharomyces cervisiae)。其次,优化了菌株#17的转化条件,主要对菌株#17转化的辅助底物、辅助底物浓度、反应时间、反应温度进行优化实验。优化转化条件为:辅助底物为异丙醇,异丙醇的添加浓度为25g/L,底物的转化浓度为1.5g/L,温度35℃,反应时间24h。通过减压蒸馏方法提高菌株的产率,利用真空泵可以将生成的丙酮抽出,使得底物转化反应向正向移动,提高了产物(S)-DHTP的产率,其产率可达到72.33%,产率提高了7.78%。最后,采用结晶纯化法可以提高产物的对映体过量值,其对映体过量值可达到99.68%。建立了酿酒酵母-菌#17转化制备盐酸度洛西汀中间体手性醇(S)-DHTP的生物转化模型,转化条件为:底物的转化浓度为1.5g/L,辅助底物异丙醇的添加浓度为25g/L,温度35℃,反应时间24h。转化液经-0.085Mpa的减压蒸馏、结晶纯化获得高产率、高光学纯度的产物(产率>70%,e.e.%>99%)。
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