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实验目的:本实验针对胃癌(T3N0)和胃癌(T3N1-3)患者的血液标本应用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)进行检测,找出胃癌淋巴结转移阳性和胃癌淋巴结转移阴性的患者之间具有差异的代谢产物,通过差异代谢产物建立胃癌淋巴结转移预测模型,研究代谢产物与患者生存与后的关系。实验方法:1、样本处理:将样本从-80°冰箱中取出,常温下解冻和处理,加入乙腈、离心,取上清液备用。2、LC-MS分析:采用液相色谱-质谱仪对样本进行检测,得到胃癌淋巴结转移阳性和胃癌淋巴结转移阴性患者的血液代谢质谱。3、数据处理:通过Marker View软件对原始数据提取后,进一步应用主成分分析(principal component analysis,PCA)、t检验、分层聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、支持向量机等统计方法对得到的实验数据进行分析,找到两组患者之间有差异的代谢产物,通过判别分析建立胃癌淋巴结转移预测模型,进一步结合临床病理资料和代谢产物建立胃癌淋巴结转移风险评分模型,预测胃癌淋巴结转移状态。实验结果:第一部分,在116例胃癌患者血液样本的研究中,通过整体的总离子流图可以很直接的得观察出两组样本代谢产物的差异,主成分分析得分图能够将胃癌淋巴结转移阳性组和胃癌淋巴结转移阴性组区分开来,再经过t检验获得69个差异代谢产物,进一步应用降维因子分析法得到差异的代谢产物19个,应用判别分析法得到8个差异代谢产物,通过判别分析建立胃癌淋巴结转移预测模型,对训练集和验证集进行验证,从而得到模型的精度、特异度和灵敏度。再对判别分析结果中预测正确的T3N0和预测错误的T3N0进行生存分析,结果预测错误的生存期短且有统计学差异。第二部分,应用逻辑回归获得4个差异代谢产物和2个临床病理参数建立胃癌淋巴结转移分险评分模型,结果显示随着风险评分增加淋巴结转移率增高。第三部分,将逻辑回归后获得4个差异代谢产物,在人类代谢组数据库中根据物质质核比(M/Z)进行结构鉴定,Tyrosyl-Glycine;Cyclic GMP;Homophytanic acid;Farnesyl pyrophosphate.根据4个差异代谢产物聚类分析,根据每个物质的响应值分组,进行生存分析,结果显示4个代谢产物均对患者生存有影响。结论:通过对胃癌伴淋巴结转移阳性和胃癌伴淋巴结转移阴性患者的血液标本进行液相色谱质谱联用技术的分析,T3期胃癌不同淋巴结转移状态患者的代谢产物之间存在差异,19种差异代谢产物的聚类分析能够很好区分T3期胃癌淋巴结转移状态,判别分析所建立的判别模型对患者的生物学行为有一定预测能力,基于代谢产物和临床病理参数建立胃癌淋巴结转移预测模型有良好的预测淋巴结转移的能力,结果发现2组患者之间有4种明显差异的代谢产物:Tyrosyl-Glycine;Cyclic GMP;Homophytanic acid;Farnesyl pyrophosphate。4种代谢产物与患者的生存及预后有关。