目的:肝脏缺血/再灌注损伤(LIRI)是肝脏移植以及肝脏外科手术中常见的并发症,对肝脏外科手术的效果以及术后患者肝功能的恢复有着巨大的影响。多少年来,如何减少肝脏损伤,尽最大可能做到对肝脏的保护并且提高患者预后,一直是肝脏手术中研究的热点以及难点。近年来,对于LIRI具体机制的相关研究不断增多,然而尚未完全阐明。本研究通过探索小鼠LIRI中miR-101的表达情况以及细胞自噬活性的变化来探讨miR-101介导自噬在小鼠LIRI中的作用,进而揭示miR-101在LIRI中自噬调节的潜在功能和机制,以期为LIRI的临床治疗和研究提供一种新的思路。方法:建立小鼠肝脏节段性(70%肝叶夹闭)缺血以及再灌注损伤模型,血生化指标检测小鼠血清中转氨酶(ALT、AST)含量的变化,HE染色观察小鼠肝脏组织病理学损伤变化,TUNEL试剂盒检测小鼠肝脏细胞凋亡情况,免疫组化观察小鼠肝脏细胞增殖与凋亡情况,qRT-PCR检测各组miR-101、AMPK mRNA、mTOR mRNA 的变化情况,Western Blot 检测各组 AMPK、mTOR、p-mTOR、P62、Caspase-3 与 LC3 的表达情况。小鼠预先给予 miR-101 agomir/antagomir 以及自噬抑制剂3-MA处理后进一步验证miR-101在LIRI中的作用。使用miR-101 mimics/inhibitor转染AML12细胞,并建立细胞缺氧/复氧(H/R)模型来体外模拟LIRI,通过共聚焦显微镜与免疫荧光观察AML12细胞内自噬情况变化,qRT-PCR 检测各组 miR-101、AMPK mRNA、mTOR mRNA 的变化情况,Western Blot 检测各组 AMPK、mTOR、p-mTOR、P62、Caspase-3 与 LC3 的表达情况。使用自噬激活剂雷帕霉素以及自噬抑制剂3-MA预先处理AML12细胞后建立H/R模型进一步明确自噬对H/R处理诱导AML12细胞存活能力的影响以及miR-101通过影响自噬表达对LIRI产生的作用。结果:小鼠肝脏发生缺血/再灌注后,血清AST/ALT表达水平有所升高,且在再灌注12 h达到峰值;病理检测发现,再灌注后肝组织发生水肿肿胀、脂肪变性、空泡样变、片状坏死、中性粒细胞浸润和肝窦淤血等表现,而且这些病理改变随着再灌注时间的加长逐渐加重,在再灌注12 h时损伤最为严重;免疫组化以及TUNEL检测LIRI后肝细胞的增殖和凋亡情况发现,再灌注后细胞凋亡明显增加,细胞增殖水平明显降低;qRT-PCR结果示,再灌注后miR-101以及mTOR的表达含量逐渐下降,而AMPK的表达含量不断增加;Western Blot示AMPK、Caspase-3、LC3蛋白水平随着缺血/再灌注时间的延长逐渐增加,相反mTOR、p-mTOR以及P62的表达则随着缺血/再灌注时间的延长逐渐减少。在体内过表达miR-101后,缺血/再灌注导致的病理损伤以及细胞凋亡情况明显减轻,且mTOR的基因与蛋白水平均增加,相反AMPK的基因与蛋白水平明显下降,加用自噬抑制剂3-MA后miR-101的这种减轻肝损伤的表现更加显著。通过体外培养小鼠正常肝细胞AML12并建立H/R模型来体外模拟LIRI,研究发现,自噬水平的升高与肝细胞的损伤程度成正相关。当使用了 miR-101激动剂后自噬水平被抑制,肝细胞损伤明显减轻;共聚焦结果示,过表达miR-101后自噬体以及自噬溶酶体数量显著减少,且免疫荧光提示P62蛋白发生堆积无法降解;MTT结果显示,细胞发生缺氧/复氧时细胞存活率均有所下降。当使用雷帕霉素促进自噬的表达以及雷帕霉素和miR-101抑制剂共同作用下时,细胞的存活率显著下降。相反使用自噬抑制剂3-MA处理细胞后,细胞的存活率明显有所提升。qRT-PCR结果显示,细胞在缺氧/复氧后,过表达miR-101促进mTOR的表达并抑制 AMPK 的表达;Western Blot 结果示,过表达 miR-101 后 AMPK、Caspase-3、LC3的表达水平在明显降低,相反mTOR蛋白水平显著升高;当使用雷帕霉素以及miR-101抑制剂后mTOR、p-mTOR以及P62表达水平下降,Caspase-3、LC3表达增加,自噬水平升高。结论:肝脏发生缺血/再灌注损伤时miR-101的表达显著下降,AMPK的表达明显升高,且mTOR的表达受到抑制,进而自噬表达上调,加重肝脏损伤。因此miR-101可抑制自噬的表达进而减轻小鼠LIRI,促进受损肝组织的恢复。在小鼠LIRI中miR-101可通过调控AMPK-mTOR信号通路来减轻细胞自噬对于肝脏组织的损伤。