普拉洛芬治疗结肠炎预防结肠癌发生的分子机理研究

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目的:
  普拉洛芬是一种非甾体类抗炎镇痛药,目前的研究表明它主要通过抑制前列腺素合成发挥解热、镇痛、抗炎功能。目前尚未有研究证明普拉洛芬能够用于治疗结肠炎症。炎症是肿瘤发生的一个重要原因,大多数结肠癌患者都有长期反复的慢性结肠炎症病史,病史大于30年的炎症性肠病患者中20%以上发生结肠癌。本文旨在研究普拉洛芬是否能够用于结肠炎的治疗以及结肠癌的预防,并阐明其分子机理,为炎症性肠病的治疗及炎症相关结肠肿瘤的预防提供新方案。
  方法:
  用过氧化氢(H2O2)诱导细胞氧化应激,饮水中加入3%的葡聚糖硫酸酯(DSS)诱导急性结肠炎小鼠模型,腹腔注射12.5mg/kg的氧化偶氮甲烷(AOM)同时在饮水中加入3%的葡聚糖硫酸酯(DSS)诱导慢性结肠炎及结肠癌小鼠模型。DNA损伤用彗星实验和γ-H2AX免疫荧光实验检测。胞浆DNA水平用抗ssDNA和dsDNA抗体进行免疫荧光检测。基因表达用免疫印迹及实时定量荧光RT-PCR检测。用siRNA在体外培养的细胞中敲低Dicer表达,用表达Dicer shRNA的慢病毒灌肠在小鼠结肠组织中敲低Dicer表达,小鼠结肠组织的炎症情况用HE染色检测,小鼠结肠组织细胞的凋亡情况用TUNEL实验检测。
  结果:
  1.普拉洛芬能够在不同细胞系中促进Dicer表达上调;
  2.普拉洛芬通过增加Dicer表达水平降低H2O2诱导的DNA损伤和细胞凋亡;
  3.普拉洛芬通过增加Dicer表达水平增强DNA修复,从而降低胞浆DNA水平、降低白细胞介素-6的表达;
  4.在葡聚糖硫酸酯诱导的急性结肠炎小鼠模型中普拉洛芬能够恢复Dicer表达,从而减轻结肠炎炎症程度;
  5.在氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸酯诱导的结肠炎相关性结直肠癌小鼠模型中普拉洛芬可以促进Dicer表达、减轻结肠炎炎症程度并降低结肠癌的发生率。
  6.在小鼠结肠组织中敲低Dicer降低普拉洛芬的抗炎防癌效果。
  结论:
  普拉洛芬通过提高Dicer表达在炎症组织中促进DNA修复,从而降低活性氧导致的DNA损伤、减少胞浆DNA积累、抑制白细胞介素-6表达。普拉洛芬通过提高炎症组织中Dicer的表达水平减轻结肠炎炎症程度并降低结肠癌的发生率。我们的研究结果表明普拉洛芬可用于结肠炎的治疗和结肠癌的预防。
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