胚胎干细胞具有的自我更新及多向分化潜能两大特性，是细胞移植治疗手段的首选来源，也成为近年研究的热门领域。 本研究运用基于BAC的同源重组技术构建小鼠胚胎干细胞(mES细胞)Nanog基因报告体系。首先挑选包含Nanog基因启动子的BAC，通过同源重组，直接从BAC上套取Nanog启动子。再次同源重组，将报告基因插入Nanog/EGFP插入Nanog基因启动子之后，高效构建了Naong/EGFP打靶载体。通过电穿孔的方法，将打靶载体导入mES细胞系R1中，筛选后获得基因打靶的阳性细胞R5。经鉴定，R5与R1分化前具有相似的基因表达情况；R5与R1具有形成EB(embryonic body)的能力。用RT-PCR分析此两种EB，结果表明，R5及R1所形成的EB均表达内、中、外三个胚层的标志基因SOX17、Nkx2.5及Nestin。由此说明，打靶后的mES细胞R5具有与mES细胞R1相似的特性。同时，用免疫细胞化学的方法对自发分化前后的R5细胞进行OCT4的标染，观察到未分化的R5细胞团EGFP与OCT4共染，而分化后EGFP不表达的部分细胞不被OCT4标染。结果证明此报告体系能稳定的偶联表达Nanog和EGFP，且符合Nanog基因的表达模式。