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背景心梗后心室重构(Ventricular remodeling,VR)是指急性心肌梗塞(Acute myocardial infarction,AMI)后心脏在受到损伤或超负荷状态下,出现复杂的分子信号的改变和胚胎基因及蛋白的再表达,从而造成心肌细胞适应不良性肥大、心肌细胞凋亡和心肌细胞外基质纤维化,引起心室大小、形态、组织结构及功能形态等发生一系列的改变,在临床上表现为心室肥厚,心室容量的增加和心室结构的改变。心梗后心室重构进一步发展可导致心衰、猝死,是并发室性心律失常及充血性心衰甚至心源性死亡的最重要的危险因素之一。研究表明心脏具有一定的再生能力,心肌细胞不但可以进行自身的分裂、再生,而且新生的心肌细胞也参与了心脏病变组织的修复。而在心肌修复治疗中,重建梗死区心肌的血供至关重要,良好的血供是实现心肌修复的前提和基础。如果能在心梗发生后一定时间内可以增加微血管密度,促进血管新生,改善微循环,就有可能减少心肌细胞的死亡数量,并促进心肌再生。因此,如何有效促进心肌血管新生是治疗心梗后心室重构的一条重要研究思路。中医认为心梗后心室重构为本虚标实之证,正气不足为其内伤基础,气滞血瘀为其发病的直接原因,气虚血瘀为其主要的病机。因此,在治疗上将益气活血作为心梗后心室重构的治疗基本大法,在此基础上综合运用祛痰化瘀、调气理脾、清热养阴等治则,取得良好的疗效。补阳还五汤出自清代王清任的《医林改错》,是益气活血法的代表方,可补气活血通络,是中医临床治疗心脑血管疾病的常用方剂。近年来对补阳还五汤的研究发现,该方可增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及其受体的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一;补阳还五汤能促进脑出血大鼠脑内VEGFmRNA的表达,从而调整血管新生过程,这可能是其促进组织修复的机制之一。但它能否促进心梗后心室重构大鼠心脏的血管新生,促进VEGF、CD34等的表达,尚需要进一步的研究。本课题组前期对补阳还五汤抗冠脉结扎大鼠模型心梗后心室重构的作用进行初步探索。我们采用心脏超声、免疫组化染色、Masson三色法染色等对一系列反映大鼠心脏结构及功能变化、心肌纤维化的指标进行观察。结果表明,补阳还五汤可明显改善心肌梗死后大鼠左室收缩、舒张功能,抑制心梗后左心室非梗死区心肌肥大,减少心肌纤维化,具有抗心室重构作用,但其具体机制尚未明了。因此,根据本课题组近十年来对出心梗后心室重构研究的初步结果及中医药治疗的疗效,结合国内、外对心梗后心室重构的研究成果,提出以下两个观点:(1)心梗后心肌细胞有一定的再生功能;(2)补阳还五汤治疗心梗后心室重构的机制可能与促进梗死区血管新生,从而修复心肌有关。目的本研究通过采用相应的分子生物学及免疫学技术,检测补阳还五汤对心肌梗死后大鼠心肌组织中血管新生相关指标(Ⅷ因子、CD31、CD31、PH3、PCNA、VEGF-C)表达结果的影响,了解补阳还五汤能否促进这些指标的表达,探讨补阳还五汤抑制心室重构的机制,是否与促进心肌组织血管新生有关,为心梗后心室重构的防治探索一条新的思路和途径。方法1免疫组化法检测各组大鼠心肌组织中Ⅷ因子的含量实验前期本课题组将大鼠分成假手术组(Sham)、模型对照组(Model)、补阳还五汤高剂量组(BYHWD-H)、补阳还五汤中剂量组(BYHWD-M)、补阳还五汤低剂量组(BYHWD-L)及培哚普利治疗组(阳性对照组)(Perindopril)。本研究采用免疫组化法检测各组大鼠心肌组织中Ⅷ因子的表达,探讨补阳还五汤对心梗后心肌组织微血管密度的影响。2免疫荧光法检测各组大鼠心肌组织中CD31、CD34的阳性细胞数采用免疫荧光法检测各组大鼠心肌组织中CD31、CD34的阳性细胞数,探讨补阳还五汤能否促进心梗后心肌组织血管新生。3免疫荧光法检测各组大鼠心肌组织中PH3、PCNA的阳性细胞数采用免疫荧光法检测各组大鼠心肌组织中PH3、PCNA的阳性细胞数,探讨补阳还五汤能否促进心梗后心肌组织细胞增殖。4免疫组化及Western Blot法检测各组大鼠心肌组织中VEGF-C的含量采用免疫组化及Western Blot法检测各组大鼠心肌组织中VEGF-C的表达,探讨补阳还五汤能否促进心梗后心肌组织VEGF-C的表达。5统计方法数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析,结果表示为:均数±标准差(X±SD)。采用One-WayANOVA进行统计,方差齐时,组间比较采用LSD,当方差不齐时,采用Welch稳健估计,再采用Dunnett’sT3方法两两比较。P<0.05表示差异有统计学意义。结果1补阳还五汤对各组大鼠心肌组织Ⅷ因子表达的影响结果显示各组大鼠心肌组织的Ⅷ因子表达总体差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、补阳还五汤低、中剂量组及培哚普利组与假手术组相比,Ⅷ因子表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),补阳还五汤高剂量组的Ⅷ因子表达要高于假手术组(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤各剂量组的Ⅷ因子表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);培哚普利组Ⅷ因子也比模型组增高(P<0.05),但低于补阳还五汤各剂量组(P<0.05);补阳还五汤低、中、高剂量组之间的Ⅷ因子均有差异(P<0.05),呈递增趋势,其中补阳还五汤高剂量组增高最明显。结果说明,大鼠心肌梗死后,心肌组织中的Ⅷ因子表达降低,补阳还五汤与培哚普利均可增高急性心梗后大鼠心肌组织的Ⅷ因子的表达,而补阳还五汤比培哚普利更能促进Ⅷ因子的表达。其中,补阳还五汤各剂量组Ⅶ因子的表达呈递增趋势,补阳还五汤高剂量效果最佳。2补阳还五汤对各组大鼠心肌组织CD31、CD34阳性细胞数的影响结果表明各组大鼠心肌组织的CD31、CD34的阳性细胞数总体有差异,有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,其余各组的CD31、CD34阳性细胞数均增高(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤各剂量组的CD31、CD34增高明显,差异有统计学意义(P<0.05);培哚普利组与模型组相比则无差异(P>0.05),尚不能说明培哚普利可增高急性心梗后大鼠心肌组织的CD31、CD34的阳性细胞数;在促进CD31的阳性细胞数上,补阳还五汤中剂量组比低剂量组增高CD31有意义(P<0.05),低剂量组与高剂量间的比较差异无统计学意义(P>0.05),说明中剂量更能增高CD31;在促进CD34的阳性细胞数上,补阳还五汤各剂量组之间的CD34均无明显差异(P>0.05),说明在增高CD34上,补阳还五汤各剂量效果相同;补阳还五汤各剂量组的CD31、CD34均比培哚普利组增高(P<0.05),说明在增高CD31、CD34的阳性细胞数上,补阳还五汤均优于培哚普利,并且补阳还五汤中剂量组的效果较好。3补阳还五汤对各组大鼠心肌组织PH3、PCNA阳性细胞数的影响结果表明各实验组大鼠的心肌组织中PH3、PCNA阳性细胞数总体有差异,有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,其余各组的PH3、PCNA的阳性细胞数均增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤中、高剂量组的PH3增高明显(P<0.05),低剂量组PH3增高无差异(P>0.05),而补阳还五汤各剂量组的PCNA增高明显,差异有统计学意义(P<0.05);培哚普利组与模型组相比PH3、PCNA阳性细胞数无差异(P>0.05),尚不能说明培哚普利可增高急性心梗后大鼠心肌组织的PH3、PCNA;在补阳还五汤各剂量组间的PH3、PCNA阳性细胞数均无明显差异(P>0.05),说明在增高PH3、PCNA上,补阳还五汤各剂量组效果相同,且优于培哚普利。4补阳还五汤对心肌组织VEGF-C的蛋白表达的影响免疫组化结果显示各组大鼠心肌组织的VEGF-C表达的面积和积分光密度总体差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤各剂量组的VEGF-C表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),培哚普利组与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。补阳还五汤低、中、高剂量组之间的VEGF-C表达呈递增趋势,中、高剂量组蛋白表达无差异(P>0.05)。与培哚普利组相比,补阳还五汤各剂量组VEGF-C表达均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测VEGF-C及内参β-actin灰度值之比显示:与假手术比较,模型对照组大鼠心肌组织VEGF-C蛋白含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);补阳还五汤低剂量组表达降低(P<0.05),中剂量组与假手术组无差异(P>0.05),高剂量组表达增高(P<0.05)。与模型对照组相比,补阳还五汤低、中、高剂量治疗组心肌组织VEGF-C的蛋白含量均有不同程度的增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。补阳还五汤各剂量之间的VEGF-C表达差异有统计学意义(P<0.05),其数值呈递增趋势,其中补阳还五汤高剂量组增高的最明显。说明在急性心肌梗死后,补阳还五汤可明显升高大鼠心肌组织中VEGF-C蛋白表达的含量,且中、高剂量效果更佳,尚不能说明培哚普利可促进VEGF-C的表达。结论补阳还五汤可促进急性心梗后心室重构大鼠心肌组织中Ⅷ因子、CD31、CD34、PH3、PCNA、VEGF-C的表达,增加心肌微血管密度,促进细胞增殖,促进血管新生,效果优于培哚普利,其中补阳还五汤中、高剂量组效果更佳。说明补阳还五汤可抑制心梗后心室重构,其抗心室重构的机制可能与促进心脏的血管新生有关。