肉制品和饲料中鸭源性成分PCR鉴别方法标准化研究

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最近据媒体报道及相关职能部门反映鸭肉制成“涮羊肉和烤羊肉”现象很严重。针对此状况,很多部门诸如工商、药监和质监等部门需要对市场中可疑样品进行检测,迫切需要建立该方面相关标准,为肉制品中掺假鉴定及责任追查提供标准依据。另一方面,处于监管和国家层面动物疫病控制的大局,各国普遍禁止动物源性成分在某些动物源性饲料,特别是反刍动物饲料中使用,因此需要建立该方面检测方法标准。在本研究中,根据鸭特异性基因细胞色素C氧化酶III(COIII)基因序列,设计普通PCR特异引物及荧光定量PCR引物及探针,分别建立肉制品和动物源性饲料中鸭源性成分检测的普通PCR和实时荧光PCR两种检测方法。在肉制品鸭源性成分检测研究中,对所设计引物进行特异性预测及实际检验,PCR扩增结果表明所应用引物与常见畜禽物种包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉间无同源性,引物具有较大特异性。在对市售肉卷、肉板中鸭源性成分实际检测中,均能对其掺有的鸭源性成分有效检测,与市场调查结果一致。另外,采用50mg/kg羊肉DNA溶液对鸭肉DNA进行稀释,结果表明:较大浓度羊肉DNA的存在不影响鸭肉灵敏度测试,灵敏度可达0.1μg/kg,能够满足实际检测需要。另外,肉制品由于加工等工艺原因,DNA会受到影响,特别是加热时DNA片段会变短,因此,引物设计时所要扩增的目的片段要求较短。本研究中设计的引物所扩增的目的片段较短(201bp),适于对加工的肉制品中添加的鸭源性成分进行检测。对烤鸭、鸭脖、鸭翅、鸭肠制品和鸭舌、鸭爪、鸭酱进行实际样品测试,均能够有效检测出鸭源性成分。结果表明,建立的普通PCR方法和荧光定量PCR方法均能快速、有效检测出样品中的鸭源性成分,方法快速、准确、灵敏度高、特异性强。在对动物源性饲料中鸭源性成分检测方法研究中,以掺有鸭骨粉的骨粉饲料、鸭血饲料、水解羽毛粉和未掺有鸭骨粉的水产预混料、葵花饼粉动物饲料分别进行普通PCR检测和荧光定量PCR检测,结果表明该方法能够有效检测出骨粉饲料、鸭血饲料和水解羽毛粉中鸭源性成分,而水产预混料、葵花饼粉未检出鸭源性成分。在灵敏度试验中,当鸭成分含量在100%、10%、1%、0.1%时有扩增条带,最低检出限为0.01%,灵敏度能够满足实际检测需要。结果表明,建立的普通PCR方法和荧光定量PCR方法均能对样品中的鸭源性成分进行检测,方法快速、准确、灵敏度高,能够满足实际检测需要。
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