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目的:探究肝癌细胞下调IGF-1活性的分子机制,并且阐述IGF-1与B淋巴细胞在Ras癌基因诱导肝肿瘤发生过程中的扮演的角色及二者的关系。方法:1、提取9月龄H-ras12V转基因雄鼠肝肿瘤组织(T)、肿瘤周围组织(P)以及9月龄非转基因雄鼠肝组织(Wt)样本,分别进行病理分析和总蛋白质以及总RNA的提取;应用蛋白质印迹法检测组织样本中p-ERK、ERK、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达;荧光定量PCR检测IGFBP1、IGFBP3、GHR、IGF-1在组织样本中的m RNA表达水平;酶联免疫分析雄鼠血清中IGF-1、Ig G1和Ig G2水平。2、采用流式细胞法(FCM)分别检测3、5和9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠及对照组正常C57BL/6J雄性小鼠的外周血中淋巴细胞比例和活性水平,同时对所有小鼠的肝组织进行病理学诊断。结果:1、蛋白质免疫印迹法检测结果显示,p-ERK的蛋白水平检测表明:T组织中的p-ERK蛋白水平为21.09±6.57,比Wt组织的0.08±0.02显著升高,t=5.80,P=0.004,比P组织的8.42±3.21也显著升高,t=4.95,P=0.005,P组织比Wt组织显著升高,t=3.75,P=0.042;ERK的蛋白水平检测表明:T组织中的ERK蛋白水平为15.98±1.94,比Wt组织的4.72±1.00显著升高,t=4.02,P=0.029,比P组织的4.55±1.12也显著升高,t=4.92,P=0.005;P-PI3K的蛋白水平检测结果表明:T组织中的P-PI3K蛋白水平为0.47±0.02,比Wt组织的0.06±0.00显著升高,t=9.02,P=0.008,比P组织的0.34±0.05也显著升高,t=3.09,P=0.042,P组织的比Wt组织的显著升高,t=3.32,P=0.045;PI3K的蛋白水平检测结果表明:T组织中的PI3K蛋白水平为0.78±0.11,比Wt组织的0.03±0.00显著升高,t=11.05,P<0.001,比P组织的0.29±0.08也显著升高,t=3.96,P=0.029,P组织的比Wt组织的显著升高,t=3.42,P=0.016;p-AKT的蛋白水平检测结果表明:T组织中的p-AKT蛋白水平为0.23±0.05,比Wt组织的0.11±0.02显著升高,t=3.89,P=0.037;AKT的蛋白水平检测结果表明:T组织中的AKT蛋白水平为0.18±0.04,比Wt组织的0.06±0.03显著升高,t=2.87,P=0.042,P组织中的AKT蛋白水平为0.23±0.06,比Wt组织的也显著升高,t=4.92,P=0.010;荧光定量PCR检测结果显示,IGFBP1和IGFBP3 m RNA水平在肿瘤组织中显著性升高;IGF-1和GHR在肿瘤组织中显著性降低;酶联免疫分析结果显示,9月龄转基因雄鼠血清中IGF-1水平(1.27±0.35)较同月龄对照组(1.90±0.34)降低,差异有统计学意义,t=-4.225,P=0.020;9月龄转基因雄鼠血清中Ig G1水平(39.91±4.86)较同月龄对照组(49.65±7.14)降低,差异有统计学意义,t=-3.845,P=0.011;9月龄转基因雄鼠血清中Ig G2水平(28.80±2.45)较同月龄对照组(34.86±4.29)降低,差异有统计学意义,t=-3.024,P=0.006。2、3月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠和3、5和9月龄的对照组雄性小鼠的肝脏均未出现显著的病理学变化。5月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠的肝脏中出现多发性结节,而9月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠的肝脏则发生了多发性肝肿瘤。转基因和非转基因小鼠的其他组织器官无显著病理变化。对于B淋巴细胞,与同月龄的正常C57BL/6J雄性小鼠相比,3、5和9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的外周血中B淋巴细胞所占的比例(s Ig M+CD23+和s Ig M+B220+)显著降低(P<0.01),活性B淋巴细胞(CD19+CD69+)所占的比例在5和9月龄也都显著降低(P<0.05)。并且随着月龄的增加及H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤的发生和发展,外周血B淋巴细胞和活性B淋巴细胞的比例呈逐渐降低趋势。对于T淋巴细胞,与同月龄正常C57BL/6J雄鼠相比,3、5月龄H-ras12V转基因雄鼠的外周血T淋巴细胞(CD3e+)比例及活性T淋巴细胞(CD3e+CD69+、CD3e+CD25+)比例均无显著差异(P>0.05),但9月龄H-ras12V转基因雄鼠的外周血T淋巴细胞比例及活性T淋巴细胞比例均显著降低(P<0.05)。结论:体内实验证实了ras信号通路的活化引起了IGFBP1、IGFBP3 m RNA水平的升高,GHR和IGF-1 m RNA水平的降低。随着H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤的发展恶化,其外周血中B淋巴细胞及活性B淋巴细胞的比例显著降低。