低剂量辐射激活的脐血干细胞重建造血功能的体内研究

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自20世纪80年代以来,低剂量辐射(LDR)的兴奋效应和适应性反应日益受到人们的关注。近年来发现LDR对造血系统也存在兴奋效应,体外实验已有报道LDR可促进骨髓造血干/祖细胞增殖,诱导T.B细胞成熟,抗肿瘤转移和复发作用。造血干细胞的临床应用前景日益广阔,除应用于血液系统及其他系统恶性肿瘤治疗外,现已应用于多种遗传病、自身免疫性疾病、局部血管病变等相关性疾病的治疗。脐带血(UCB)因其来源丰富且制备便利,已成为用于临床移植的造血干/祖细胞(HS/PCs)的重要来源,脐血干细胞移植(UCBT)近年来受到国内外学者的高度重视。可以预见LDR激活后的脐血用于临床,在刺激造血、增强免疫力和抗肿瘤方面,均可优于活化前的脐血。那么,LDR能否作为一种新的优化方法而应用于临床呢?主要取决于LDR激活的脐血HS/PCs是否具有快速重建造血的能力,为证实这一问题,我们进行了LDR激活的脐血干细胞重建造血性能的研究,从而为LDR作为一种优化脐血干细胞移植的新方法奠定理论和实践基础。我们提取脐血单个核细胞作为移植物,采取经胫骨骨髓腔移植方法,通过对脐血和(或)移植后小鼠进行低剂量辐射而将其兴奋效应引入体内。实验中依LDR应用方式将87只NOD/SCID小鼠随机分组如下:照射对照组:小鼠经350cGy亚致死剂量照射后不进行任何处理;实验组:①CB-MNC组:小鼠经350cGy亚致死剂量照射后于4~6h内输注CB-MNC:②CB-MNC+LDR组:小鼠经350cGy亚致死剂量照射后4~6h内输注CB-MNC,约12小时后给予75mGy低剂量辐射;③LDR CB-MNC组:脐血经75mGy低剂量辐射后于4-6h内分离获得MNC,输注给经350cGy亚致死剂量照射后小鼠;④LDR CB-MNC+LDR组:脐血经75mGy低剂量辐射后4-6h内分离获得MNC,输注给经350cGy亚致死剂量照射后小鼠,约12小时后给予75mGy低剂量辐射。其中LDR CB-MNC在脐血分离前4小时内进行,LDR-Mice在移植后约12小时进行,对于第④组LDR CB-MNC和LDR-Mice间隔时间约为24小时。为保证LDR效应的观察时间一致性,②③④组的第一取材时间点为末次LDR后48h,而后各组均在移植后7d、14d、21d时处死小鼠(对于每个取材时间点,每组各取5只小鼠进行检测)。结果表明,移植组小鼠存活率为95%。存活小鼠骨髓、脾脏、外周血细胞均可以检测到人类基因组中特异性Alu基因的表达(+21d)。各组小鼠骨髓细胞均有人CD34和CD45分子表达,且高于移植前脐血中含量;+21d时应用LDR各组小鼠骨髓中CD34~+CD45~+细胞比率高于单纯移植组。移植后,而应用LDR各组小鼠骨髓中CD49d~+细胞比率起初为较低水平(+3d,p<0.05),而后开始上升;+21d时,各组差异无统计学意义(p>0.05)。受鼠外周血象水平均有大幅度下降,+10d~+14d时血象达最低,而后开始上升。应用LDR各组三系恢复均早于CB-MNC移植组,在血象恢复期,实施LDR各组WBC、Plt计数和Hb含量均明显高于单纯移植组(p<0.05):+21d时LDR各组白细胞计数恢复正常,而CB-MNC移植组尚未达到正常水平;此时各组Hb和Plt均恢复正常。+21d时脾脏明显增大,脾指数明显增加,与单纯移植组相比,应用LDR各组更为明显(p<0.05)。上述结果表明:植入人源细胞后后受鼠骨髓能够腾出“龛位”供脐血干细胞植入,并且提供HS/PCs分化的造血微环境,UBSCs在小鼠骨髓中积极的增殖分化、发挥造血功能:LDR行使其对造血系统的兴奋效能:LDR后在受鼠体内造血干/祖细胞有更强的增殖和分化能力,而且移植前对脐血细胞LDR和移植后对小鼠进行LDR二者协同发挥了兴奋放大效应,为LDR作为一种优化脐血移植的新策略奠定理论和实践基础。
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