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【目的】探讨miRNA-200a通过抑制HGF/c-met通路在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞电离辐射作用中的生物学功能和分子机制,为NSCLC的临床放射治疗提供新的生物学标志物和分子治疗靶点。【方法】第一部分:1.应用免疫组织化学技术和Western Blot(蛋白质印记法)检测肺癌组织及对应正常肺组织中HGF的表达量。2.应用实时荧光定量PCR和Western Blot检测HGFsiRNA对NSCLC细胞中HGF表达水平的抑制率。3.应用Transwell试验检测低表达HGF的NSCLC细胞迁移和侵袭能力的改变。第二部分:1.筛选出以HGF作为靶基因所对应的microRNA,应用实时荧光定量PCR检测所筛选出的microRNA在肺癌及正常肺组织中的表达量。2.应用实时荧光定量PCR检测转染候选microRNA模拟物后,NSCLC细胞中HGF的表达水平变化。3.应用荧光原位杂交检测肺癌及对应正常肺组织中miRNA-200a的表达量。4.应用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-200a对HGF的3’-UTR是否具有抑制调控作用。5.应用Western Blot检测过表达miRNA-200a的NSCLC细胞中HGF、c-met蛋白水平的表达改变。6.应用Transwell实验检测过表达miR-200a的NSCLC细胞迁移和侵袭能力的改变。第三部分:1.应用流式细胞术检测分别低表达HGF和过表达miRNA-200a的NSCLC细胞的凋亡率变化。2.应用免疫荧光染色检测分别低表达HGF和过表达miRNA-200a的NSCLC细胞在电离辐射作用下DNA损伤的改变。3.应用克隆实验检测在不同电离辐射剂量点作用下分别低表达HGF和过表达miR-200a的NSCLC细胞的放射敏感性的改变。【结果】第一部分:1.HGF在肺癌组织及对应的正常肺组织中表达差异性明显,在肺癌组织中明显增高。2.HGF siRNA明显抑制了NSCLC细胞中HGF、c-met的表达水平。3.低表达的HGF能够降低NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。第二部分:1.以HGF作为靶基因筛选出miRNA-200a和miRNA-141,在肺癌组织中miRNA-200a下降明显。2.转染候选的microRNA模拟物后,过表达miRNA-200a的NSCLC细胞中HGF的表达水平下降明显。3.肺癌组织中的miRNA-200a表达水平相较于对应的正常肺组织下降明显。4.miRNA-200a可与靶基因HGF的3’-UTR特异性位点互补配对结合,从而发挥对HGF的抑制调控作用。5.过表达miRNA-200a后,NSCLC细胞中HGF、c-met的蛋白表达量下降。6.过表达miRNA-200a后,NSCLC细胞的迁移及侵袭能力下降。第三部分:1.低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞的凋亡率均显著增高。2.低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞在电离辐射作用后,DNA损伤相较于正常组明显增多。3.分别在0Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy剂量的电离辐射作用下,低表达HGF或过表达miRNA-200a的NSCLC细胞克隆率明显降低,放射敏感性增高。【结论】在NSCLC发展过程中,抑制了miRNA-200a的表达,促使miRNA对靶基因HGF的调控抑制作用降低,靶基因HGF表达水平增高,进一步激活c-met信号通路,从而产生放射抵抗性,从而加速了NSCLC的进展。