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目的：细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)是一种增殖快，抗瘤谱广，抗瘤活性高的免疫活性细胞，可促进患者免疫系统的重建、消除残留病变，对多种恶性肿瘤均有一定的疗效。化疗存在骨髓毒性，且容易造成“免疫抑制”，不利于免疫治疗。然而，近来研究发现许多化疗药物除具有直接的细胞毒作用外，也可作为抗肿瘤免疫反应的佐剂，免疫治疗也有增强化疗敏感性的潜能，化疗与生物治疗之间有相互增效的潜能。但生物治疗和化疗之间增效的机制复杂，研究较多的为化疗与免疫逃逸。而关于免疫治疗和化疗对肿瘤缺氧微环境的影响研究不多。洛铂(LBP)是第三代铂类抗肿瘤药物，起效快、持续时间长，在肿瘤组织中浓度高而血浆中浓度低。本研究通过检测结肠癌26（colon26）荷瘤小鼠体内缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a，HIF-1a及T细胞亚群的表达，探讨CIK对荷瘤小鼠体内缺氧微环境及免疫功能的影响，进一步探讨洛铂和CIK的联合应用对两者的影响作用。为化疗联合生物治疗的临床应用提供理论依据。方法：1建立小鼠结肠腺癌26（colon26）细胞移植瘤模型，从接种细胞第8天起，分别用CIK、洛铂（LBP）+CIK、洛铂处理，生理盐水（NS，）处理组（control group）作为对照。小鼠于治疗结束1周后引颈处死小鼠，剥离瘤体，分别称量瘤重；取出小肠、脾组织。2采用实时荧光定量PCR（real-time PCR，RT-PCR）方法检测移植瘤小鼠瘤组织中和小鼠小肠组织中HIF-1a的基因表达。3采用流式细胞技术（flow cytometry，FCM）检测各组小鼠脾脏单个核细胞T细胞亚群CD4~+、CD8~+细胞百分率以及CD4~+/CD8~+比值。4采用扫描电镜观察各组小鼠小肠粘膜表面的变化情况。5数据采用SPSS16.0统计学软件进行处理，定量资料用均值±标准差(χ±s)表示,两组间比较用t检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。结果：1CIK及洛铂对移植瘤体积的影响：与生理盐水组相比，CIK组小鼠肿瘤体积缩小，但无统计学意义（P>0.05），洛铂组和洛铂+CIK组肿瘤体积缩小，均有统计学意义（P<0.05）；与CIK组相比，洛铂组肿瘤体积缩小更明显，有统计学意义（P<0.05），与洛铂组相比，洛铂+CIK组肿瘤体积缩小更明显，有统计学意义（P<0.05）(Table-1)。2HIF-1a的基因表达及小鼠脾T淋巴细胞的变化：移植瘤小鼠瘤组织和小肠组织均有HIF-1a基因表达，瘤组织中HIF-1a基因表达明显高于小肠（P<0.05），而健康小鼠小肠组织中未见其表达（Fig.3,4，Table-2）；移植瘤小鼠脾组织中的CD4~+T细胞百分率及CD4~+/CD8~+T比值明显低于正常小鼠（P<0.05）（Fig.5-9，Table-3）。3CIK及洛铂对小鼠瘤组织中HIF-1a的基因表达的影响：实时荧光定量分析显示，与生理盐水组相比，CIK组小鼠瘤组织中HIF-1a的基因表达降低，但无统计学意义（P>0.05）；洛铂+CIK组及洛铂组HIF-1a的基因表达降低，均有统计学意义（P<0.05）；与洛铂组相比，洛铂+CIK组降低更明显，有统计学意义（P<0.05）；洛铂组与CIK组相比，洛铂组HIF-1a降低更明显，有统计学意义（P<0.05）（Fig.3,4，Table-2）。4CIK及洛铂对移植瘤小鼠脾T淋巴细胞的影响：与健康对照组相比，移植瘤小鼠CD4~+水平明显降低，CD4~+/CD8~+倒置，比值<1，有统计学意义（P<0.05）；与生理盐水组相比，CIK组及洛铂+CIK组小鼠CD4~+T细胞百分率、CD4/CD8均升高，有统计学意义（P<0.05），洛铂组CD4~+T细胞百分率及CD4~+/CD8~+降低，有统计学意义（P<0.05）；与洛铂+CIK组比较，CIK组小鼠CD4~+T细胞百分率CD4~+/CD8~+升高更为显著，有统计学意义（P>0.05）（Fig.5-9，Table-3）。5CIK及洛铂对移植瘤小鼠小肠粘膜的影响：扫描电镜显示，生理盐水组小鼠肠粘膜变薄、萎缩，绒毛顶端溃疡明显（Fig.10），而CIK组肠粘膜微绒毛宽大、钝圆，表面平滑，接近肠绒毛顶部为圆形，相互紧贴，密集分布，绒毛间隙狭小（Fig.11）；LBP组小肠粘膜表面肠绒毛与生理盐水组相比明显变短，表面凹凸不平，数量减少，绒毛间距明显增宽（Fig.12,13）；LBP+CIK组小鼠肠粘膜改变与生理盐水组相比，变化不大，绒毛顶端有凸起状溃烂（Fig.14,15）。结论：1在colon26结肠癌移植瘤小鼠瘤组织及小肠组织中均存在缺氧诱导因子-1a的表达，移植瘤小鼠的免疫功能降低，单纯洛铂化疗进一步降低移植瘤小鼠的免疫功能。2洛铂联合CIK，可以改善肿瘤缺氧微环境，促使免疫重建，增强CIK的抗瘤效果。3CIK胃肠毒副反应小，并且在一定程度上可改善肿瘤及化疗导致的肠粘膜损伤。