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核糖核酸酶抑制剂(RibonucleoseInhibitor,RI)广泛分布于哺乳动物的各种组织器官中,尤以胎盘中含量最为丰富。
来源于人胎盘的核糖核酸酶抑制剂(PlacentalRibonucleaseInhibitor,PRI)与核糖核酸酶A以1∶1比例紧密结合成复合物,抑制90%以上的酶活性。PRI与核糖核酸酶A的结合能凋节细胞内的RNA代谢,对细胞的生理功能造成很多影响;PRI还能与血管生长因子(angiogenin,ANG)紧密结合,能够阻断细胞对血管生长因子的粘附和强烈抑制血管生长因子活性,从而具有抗肿痛作用。
本研究的目的就是获得核糖核酸酶抑制剂基因-RNH在大肠杆菌中的克隆与大量表达。为了使得核糖核酸酶抑制剂能够在大肠杆菌中成功地、稳定地表达,必须确定其克隆基因序列正确无误。首先将核糖核酸酶抑制剂基因RNH插入T质粒载体中,转化大肠杆菌菌株DH5a。经测序无误后再将该基因连接表达载体pQE-30上,接着转入大肠杆菌菌株M15中。经过IPTG的诱导表达,在大肠杆菌中大量表达核糖核酸酶抑制剂。
克隆和大量表达高活性的核糖核酸酶抑制剂使得对蛋白分子高级结构和它的生物学功能的研究成为可能,进而研究其与血管生长因子结合的分子机制,以及作为抑制血管生成药物抗肿瘤形成的分子机制。