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连翘(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物,系多年生落叶灌木,主要分布在我国河南、山西、陕西等地,含有连翘苷、连翘酯苷、芦丁、齐墩果酸等主要化学成分,具有抗菌、消炎、解热的作用,常用连翘治疗风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症,为我国临床常用传统中药之一,具有较高的药用价值。
陕西商洛地区所产的连翘是地道药材。据考证,陕西商洛地区特有的地理位置、气候、土壤条件很适合于连翘的生长,现有野生连翘面积和收购量居陕西省第一,是全国连翘主产区之一。目前,在中药材生产和质量控制方面,国际上还没有统一的标准,因此,中药材内在质量标准的可控性和均—性便成为中药材生产的核心问题,而中药指纹图谱技术的发展与应用,为研究中药材质量控制提供了有效的思路和方法。
本课题以陕西商洛地区药材基地连翘为研究对象,采用高效液相色谱法(HPLC)对该基地连翘中不同植株相同部位材料、同一植株不同材料中连翘苷的含量进行了测定和对比,建立了连翘不同部位HPLC指纹图谱,为陕西商洛地区药材基地连翘的质量控制提供新方法和理论依据。
实验的主要结果如下:1、对连翘不同材料提取方法进行了比较研究,最终选择用纯甲醇超声提取,与文献中提到的提取方法相比较,方法简单,易操作,提取比较充分。连翘叶和连翘果的加工流程为:采摘→常温烘干→粉碎过60目筛→精确称取→超声30min→提取液;连翘花的加工流程为:采摘→常温烘干→直接粉碎→精确称取→超声30min→提取液;
2、利用HPLC测定了连翘不同植株相同部位材料中连翘苷的含量:连翘花中连翘苷的含量为0.80%±0.34%;青翘时期叶中连翘苷的含量为3.05%±1.21%;老翘时期叶中连翘苷的含量为2.48%±1.31%;青翘中连翘苷的含量为0.28%±0.10%;老翘中连翘苷的含量为0.20%±0.03%。符合2005年版药典规定连翘苷含量不得低于0.15%的要求;
3、利用HPLC测定了连翘同一植株不同部位材料中连翘苷的含量:连翘花中连翘苷的平均含量为0.68%;青翘时期叶中连翘苷的平均含量为3.37%;老翘时期叶中连翘苷的平均含量为2.99%;青翘中连翘苷的平均含量为0,19%;老翘中连翘苷的平均含量为0.13%。由此得出:连翘同一植株不同部位材料中连翘苷的含量关系:青翘叶>老翘叶>花>青翘>老翘;
4、分别建立了连翘叶、连翘果、连翘花中连翘苷含量的HPLC检测方法。色谱条件为:检测波长205nm;流速1.0ml/min;流动相采用A(甲醇)一B(0.1%冰醋酸)梯度洗脱:①连翘叶:20%~25%A(0.01~5min.),25%~30%A(5~15min),30%~40%A(15~40min),40%~50%A(40~65min)。②连翘果和花:15%~20%A(0.01~5min.),20%~25%A(5~20min),25%~40%A(20~32min),40%~42%A(32~50min),42%~50%A(50~60min),50%A(60~65min);
5、通过对连翘不同部位指纹图谱的系统研究,建立了连翘不同部位指纹图谱的研究方法:以甲醇超声提取制备样品溶液,色谱条件同连翘苷含量测定。方法学考察表明:连翘叶的测定精密度RSD<2.38%,重现性RSD<2.73%,稳定性RSD<4.97%;连翘果和连翘花的测定精密度RSD<2.35%,重现性RSD<2.07%,稳定性RSD<1.70%,样品均在48h内稳定;
6、测定了12批连翘样品不同部位的HPLC指纹图谱,确定连翘叶、连翘果和连翘花的共有峰分别为13个、10个和13个。通过与标准品色谱图比对,在连翘叶HPLC指纹图谱中,确定10号峰为连翘苷;在连翘果HPLC指纹图谱中,确定6号峰为连翘苷;在连翘花HPLC指纹图谱中,确定11号峰为连翘苷。同时,制定了连翘不同部位指纹图谱技术参数,并以连翘苷为对照峰,分别计算了12个样品共有峰的相对保留时间、相对峰面积和相似度。