【摘 要】
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氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)是一种合成抗菌药物,有抗菌活性强、抗菌谱广、药物动力学特征好的特点,被广泛应用于人和动物疾病防治中。由于畜牧业中对该药物的滥用,食品中OFL残留通过食物链在人体中富集,对健康造成严重影响,并增加致病菌耐药的可能。论文研究了基于核酸适配体识别的新型检测探针在OFL残留检测中的应用,结合磁分离富集技术、滚环扩增(Rolling circle amplificati
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氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)是一种合成抗菌药物,有抗菌活性强、抗菌谱广、药物动力学特征好的特点,被广泛应用于人和动物疾病防治中。由于畜牧业中对该药物的滥用,食品中OFL残留通过食物链在人体中富集,对健康造成严重影响,并增加致病菌耐药的可能。论文研究了基于核酸适配体识别的新型检测探针在OFL残留检测中的应用,结合磁分离富集技术、滚环扩增(Rolling circle amplification,RCA)技术等建立了灵敏、可靠的新型分析检测方法,为丰富食品安全技术种类和提高食品安全技术水平提供了新思路。(1)制备了表面氨基化的Fe3O4磁性纳米颗粒和Na YF4:Ce/Tb时间分辨荧光纳米颗粒,采用透射电镜射、X射线衍射和傅里叶转换-红外光谱分别对其形貌、晶型成分和表面基团进行表征。以核酸适配体为识别元件,Fe3O4磁性纳米颗粒为分离载体,Na YF4:Ce/Tb时间分辨荧光纳米颗粒为荧光标记物,构建了基于RCA信号放大的食品中OFL残留检测方法。在最佳条件下,方法具有较高的特异性和灵敏度,检测限为32pmol/L,线性范围为50 pmol/L~50 nmol/L,在食品样品中有较好的回收率。(2)探究了G-三联体(G-triplex,G3)与Tb3+之间的相互作用,并基于G3对Tb3+的敏化,提出了一种均相的利用RCA扩增G3序列敏化Tb3+发光的OFL检测方法。当OFL存在时,核酸适配体对OFL的识别而触发RCA反应,获得含有大量重复的G3序列的RCA产物,加入的Tb3+与RCA产物生成G3/Tb3+发光复合物。在最佳条件下,本方法的检测限为0.18 pmol/L,线性范围为5~1000 pmol/L,具有较高的特异性和灵敏度,在鱼肉和虾肉样品中有较好的回收率。(3)设计了一种基于核酸适配体和G3/氯化血红素(G3/hemin)的食品中OFL比色检测传感器。在该传感器中,Fe3O4磁性纳米颗粒做为分离载体,以G3/hemin为DNAzyme催化输出H2O2-ABTS的比色信号。在最佳条件下,方法的特异性良好,检测限为15.25 nmol/L,线性范围为50~300 nmol/L。该方法检测原理简单,检测时间更短,在对实际样品的加标试验中都获得了较好的回收率。本文成功构建了三种新型的用于食品中OFL残留检测的适配体传感器。这些适配体传感器分别利用磁分离富集、RCA、时间分辨荧光(Time-resolved fluorescence,TRF)和脱氧核糖酶(DNAzyme)等技术,表现出灵敏,可靠和特异的检测性能,拓展了核酸适配体的应用范围,同时也为食品安全提供了技术保障。
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