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组织工程是细胞生物学、材料学、工程学共同发展并相互融合的产物,其目的是研究和开发组织替代物,组织工程方法的建立标志着人类即将走出器官移植的年代,进入再造组织和器官的新时代。本研究对用组织工程方法修复骨缺损和再造骨组织进行了系统的研究。 1.骨髓基质干细胞成骨能力的实验研究 方法:体外分离、培养MSCs,观察其生长特点并进行碱性磷酸酶(ALP)组织化学染色:用矿化液连续培养,观察其骨形成能力。结果:第三代MSCs碱性磷酸酶染色,7—8%阳性;倒置显微镜下观察,在矿化条件下,细胞传代5—6天后,长满培养瓶的底部,约10天开始叠层生长,为局灶状,中央出现较多颗粒样改变,14—15天时,培养瓶底部肉眼可见白色小结节形成,并逐渐增大,细胞连续培养30天,Von-Kossa染色显示有局灶状钙盐沉积;扫描电镜观察,10天左右细胞呈叠层生长,20天时形成粗大的胶原纤维束,上有钙盐沉积。30天时矿化组织更大,形成骨小梁样结构。结论:MSCs易于分离培养,体外扩增速度快,在矿化条件下,骨髓基质干细胞在体外即具有很强的成骨能力,可以形成矿化结节,30天时形成骨小梁样结构。因而可以作为种子细胞,用于骨组织工程。 2.rhBMP2对培养骨髓基质干细胞的生物学效应 方法:将培养的MSCs接种于96孔板,暴露于不同浓度的rhBMP2中,观察MSCs增殖、ALP活性、蛋白质含量的变化。结果;低浓度的rhBMP2对培养骨髓基质干细胞的碱性磷酸酶活性、蛋白质含量均有明显的促进作用,且呈剂量依赖性,高浓度的rhBMP2对培养骨髓基质干细胞的增