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本文对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)不同时期的穹窿下器(SFO)进行形态学观察，探讨该室周器官在EAE发病过程中的作用。
研究方法：选择健康雌性Wistar大鼠90只，体重180-220g，随机分为5组：①对照组(n=18)：不做任何处理；②EAE6h组(n=18)：为柔膜反应组；③EAE7天组(n=18)：为潜伏期组；④EAE14天组(n=18)：为发病极期组；⑤EAE21天组(n=18)：为恢复期组。
1.EAE模型制备：用豚鼠脊髓匀浆加完全福氏佐剂，主动免疫Wistar雌性大鼠，在免疫后6小时，7天，14天，21天四个时间点，常规经心灌注、固定，取脑。分别以HE染色、扫描电镜、透射电镜、TUNEL组化染色，观察穹窿下器的形态学变化。
2.光镜标本制备：常规经心灌注，取脑，冠状方向去除视交叉以前和漏斗柄以后部分，取中间脑块，常规石蜡包埋，连续石蜡切片，片厚5μm。常规HE染色，封片。显微镜观察、照相。
3.电镜样品制备：麻醉、灌注同光镜标本制备，但灌注液为1.5％的多聚甲醛和2.5％戊二醛磷酸缓冲液。在距离脑底面3mm处做一水平切口，将脑块分为背、腹两半，在背侧半的腹侧面观察到室间孔后，在室间孔前2mm、后3mm处各做一道冠状切口，将腹侧间脑结构掰掉，所暴露的凹弧面为第三脑室顶面，其正中的小丘状突起为SFO。PBS冲洗，梯度酒精脱水，叔丁醇置换，二氧化碳临界点干燥，真空喷金，日立S-520N观察、照相。透射电镜样品制备与扫描电镜样品制备相同，取下SFO，放入4％戊二醛中保存，1％锇酸后固定，Epon812包埋，切片，T-3500N透射电镜观察、照相。
4.标示凋亡细胞：石蜡切片，片厚4μm，常规脱蜡至水，蛋白酶K消化，0.3％H2O2甲醇液封闭，冰上透化后加TUNEL反应液，POD转染，DAB显色。苏木素复染，脱水、透明，封片。显微镜观察、照相。
研究结果：
1.光镜观察结果：对照组SFO室管膜细胞表面光滑，室管膜细胞单层排列，未见淋巴细胞样细胞，凋亡细胞少见(5.33±2.52)。柔膜反应期组可见凋亡细胞增多(13.67±2.31)，室管膜细胞出现复层；潜伏期组的穹窿下器凋亡细胞比前期增多(19.33±2.08)，可见核深染的小圆形淋巴细胞样细胞增多；发病极期组，细胞肿胀，血管扩张，血管周围存在大量淋巴细胞样细胞，呈现典型的“套袖样”改变，SFO凋亡细胞数量最多(24.67±6.79)，主要分布于血管周围；恢复期组血管“套袖样”病变开始恢复，细胞浸润减轻，病灶数量减少，凋亡细胞数量较发病极期减少(9.33±1.76)。TUNEL阳性细胞在EAE后6h组增加，与对照组比较差异显著(P＜0.05)，14天达高峰。发病极期及7天组与对照组比较有显著差异(P＜0.01)；恢复期与对照组比较无显著差异性(P＞0.05)。
2.扫描电镜观察结果：
2.1.正常对照组：SFO表面纤毛稀少，与周围脑室界限清楚，室管膜细胞界限清晰，呈鹅卵石状隆起排列，形状规则，直径4μm-10μm不等，突向脑室腔。室管膜细胞表面可见密集的微绒毛，(长度0.5μm左右)或乳头状微突起(长度0.2μm左右)，在SFO表面，室管膜上可见丰富的纤维网及少数神经元样结构，主要分布在嘴侧区和过渡区，神经元样结构的胞体直径有4.5μm，突起细长，末端伸入室管膜细胞之间。
2.2.EAE组：在EAE潜伏期，室管膜细胞极度隆突，表面可见分泌物，纤毛和微绒毛减少，室管膜上可见巨噬细胞样细胞和淋巴细胞样细胞附着。在EAE发病期可见SFO室管膜细胞表面有火山口样结构，直径l-3μm，细胞内有残余的齿轮状胞核结构；凡有此结构的细胞，胞体平坦不再向脑室隆突，其体积均较正常小，细胞形态不再规则，细胞间界限不清。室管膜表面的微绒毛、微突起变化不大，有的室管膜表面细胞可见到小破孔，纤维网丰富，随临床症状的缓解，SFO室管膜细胞结构逐渐恢复正常。
3.透射电镜观察结果：
3.1.正常对照组：穹窿下器具有典型的窗性毛细血管，其内皮细胞间缺乏紧密连接，具有薄隔开窗和内皮裂隙。毛细血管基膜薄而不连续，星形胶质细胞的终足未完整包绕毛细血管。SFO室管膜细胞脑室面完整，可见微绒毛和微突起，核染色质清晰可见。髓鞘呈典型的“板层样”结构，排列有序。SFO室管膜细胞表面可见到直径约180-200nm圆形或椭圆形的分泌空泡。
3.2.EAE组：潜伏期，室管膜细胞之间连接出现锯齿状扩大区，局部可达3.2μm。室管膜下组织与血管之间由完整的隔膜隔开，SFO的血管扩张，血管周围极度水肿，血管周分布有形状不一的多泡体和囊泡；发病极期，SFO室管膜细胞连接紧密，细胞之间的扩大区少见，室管膜面可见较多分泌颗粒和丛密的微绒毛。SFO结构水肿程度最高，室管膜下可见较多的水肿泡，血管周围水肿相对减轻；可见髓鞘崩解现象，血管周围胶质细胞形成的板层样结构层数和指状突起增多。恢复期，SFO室管膜细胞表面光滑，室管膜下水肿减轻，室管膜细胞间连接紧密，无扩张现象，SFO水肿减轻，呈弥散样。
研究结论：
1.本研究首次发现SFO室管膜下组织与血管之间由完整的隔膜分开，使其分处于不同的环境中。
2.首次在透射电镜下发现SFO室管膜细胞在EAE潜伏期细胞间连接扩大，其它各期少见。
3.SFO凋亡细胞在免疫后6小时显著增多，发病极划达到高峰，恢复期减少，与EAE病程进展呈一致性。
4.随病情的发展，SFO的水肿逐渐加重，病情缓解后，水肿减轻。潜伏期至发病期水肿主要局限在血管周围，恢复期水肿为弥散性。