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TLP (TATA-box binding protein like protein)是TBP (TATA-box binding protein)家族蛋白中重要的一员,其C端保守区的结构与TBP极为相似,在各种组织中广泛表达。大量的研究表明,它在后口动物的胚胎发育、精子形成及细胞凋亡等方面起着十分重要的调节作用。但对肿瘤细胞的作用及机制尚无充分研究。本论文研究了TLP对HeLa细胞的调控作用,初步探明：TLP能抑制HeLa细胞的增殖,并通过抑制CDK1和CyclinB1的表达,将其细胞周期阻滞于G2期。首先,从LO2细胞中克隆出TLP基因的全长CDS序列,将其插入到pEGFP-N1载体中,该载体中含有的GFP (Green Fluorescent Protein)基因是由野生型的GFP基因经过光谱红移突变得来,这种突变使得该载体能产生更加明亮的绿色荧光,且能在哺乳动物细胞中高效地表达。随后,在大肠杆菌中扩增该重组质粒；抽提出质粒进行测序,测序结果与GeneBank中TLP序列完全一致,可用于后续的转染实验。然后,通过激光共聚焦显微镜检测细胞中荧光,来研究pEGFP-TLP和pEGFP-N1是否转染进入HeLa细胞以及在细胞中的表达情况。正常条件下,转染后的HeLa细胞经过24小时培养后,激发光激发后能发出强烈的绿色荧光,表明外源基因在细胞中得到有效地表达。另外,通过流式细胞术可检测不同转染时间后,重组质粒的转染效率。研究结果表明,TLP基因成功转入HeLa细胞中,并在HeLa细胞中表达。其次,通过MTT实验分别检测TLP对HeLa细胞、HepG2细胞、L02细胞、Hek293细胞及HL60细胞增殖水平的影响,结果显示HeLa细胞对TLP的作用最敏感。同时,细胞核染色也证明了这一结论,表现在核染色加深、核膜皱缩。另外,使用siRNA抑制TLP基因表达,研究结果显示,TLP的表达沉默可逆转TLP对HeLa细胞的生长抑制作用。最后,通过流式细胞术分析过表达TLP的HeLa细胞周期各时相分布,表明：过表达TLP的HeLa细胞其G2期明显延长。通过RT-PCR和Western blot对HeLa细胞中周期相关基因(:DK1、CDK2、CDK4、CyclinB1、CyclinD1和CyclinE1的转录和翻译进行检测,结果表明：TLP能抑制(Cdk1和CyclinB1基因的表达。综上所述,本论文通过构建TLP表达载体及后续研究,初步探明TLP通过抑制周期特异性基因CDK1和CyclinB1的转录和翻译,将HeLa细胞周期阻滞于G2期,最终抑制HeLa细胞的增殖。