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研究背景:乳腺癌在女性恶性肿瘤中居于首位,并且是导致女性癌症死亡的第二大常见原因,且其发病率和死亡率持续增高。近年来,随着中国城市化的速度加快,中国人乳腺癌的发病率增长速度是全球平均增长速度的两倍多,乳腺癌成为中国女性癌症相关死亡的第六大主要原因。早期检测和乳腺癌筛查是改善乳腺癌患者预后及存活的有效方法,乳腺癌综合治疗借助手术切除、放射疗法、化学药物疗法、内分泌治疗以及分子靶向治疗等多种方式,使乳腺癌治疗好转率逐年上升。但在乳腺癌的多种分型中,三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)被认为是其中预后最差的一种,由于TNBC具有异质性高、分化差、增殖能力高、转移性强的特征,且缺乏特定的分子靶点,导致TNBC的治疗整体预后较差,五年存活率显著低于其他乳腺癌亚型。因此,对TNBC发生发展过程中关键分子机制的探究,是科学工作者研究的重要方向之一。MicroRNAs是一类进化过程中高度保守的、长约19-25个核苷酸的非编码小RNA。成熟的miRNA通过与靶基因信使RNA 3’非翻译区部分互补序列特异性结合,促进mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译过程诱导转录后基因沉默,调控细胞增殖、凋亡、分化和代谢等多种生物学行为,参与细胞的正常生理过程。越来越多的研究表明,miRNAs参与包括TNBC在内的多种疾病的发生发展过程。有研究证实,miR-187在多种疾病中异常表达,并参与肿瘤的发生发展。我们通过查阅相关文献并作生物信息学分析,表明乳腺癌中miR-187高表达并参与乳腺癌转移过程,可作为乳腺癌预后以及治疗效果的分子标志物。但miR-187在TNBC中是否异常表达并发挥作用并不清楚。ARRDC3属于arrestin家族蛋白成员,是介导G蛋白偶联信号的关键分子。在TNBC中,ARRDC3异常低表达,其对整合素家族分子ITGβ4及GPCR信号蛋白PAR1的泛素化降解过程受到抑制,促进乳腺癌细胞的转移。但TNBC中ARRDC3异常表达的分子机制仍不完全清楚。我们通过生物信息学分析ARRDC3可能是miR-187的靶基因。基于以上研究和文献报道,我们提出如下科学假说:TNBC中miR-187高表达,通过靶向调控ARRDC3促进TNBC细胞的增殖和侵袭。目的:1.明确miR-187在TNBC增殖、侵袭和迁移中的作用;2.阐明miR-187调控TNBC增殖、侵袭和迁移的具体分子机制。方法:1.采用Real-time PCR检测miR-187在TNBC细胞系及组织中的表达水平;2.选取miR-187表达较低和较高的两株TNBC细胞系分别过表达miR-187或抑制miR-187,通过CCK-8实验、克隆形成实验观察miR-187对TNBC细胞增殖的作用;3.选取miR-187表达较低和较高的两株TNBC细胞系分别过表达miR-187或抑制miR-187,通过Transwell侵袭实验和迁移实验观察miR-187对TNBC细胞侵袭和迁移的作用;4.通过生物信息学分析,双荧光素酶报告系统明确ARRDC3是否是miR-187的靶基因,并通过Western-Blot检测miR-187对ARRDC3蛋白表达水平的调控作用;5.在TNBC细胞中同时过表达miR-187与ARRDC3,采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell侵袭和迁移实验明确miR-187是否通过ARRDC3调控TNBC细胞增殖、侵袭和迁移;6.通过Western-Blot检测miR-187的潜在靶基因ARRDC3在TNBC组织及细胞系中的表达。结果:1.Real-time PCR结果显示,TNBC细胞系及组织中miR-187的表达显著升高;2.过表达miR-187可促进TNBC细胞的增殖和克隆形成,抑制miR-187可抑制TNBC细胞的增殖和克隆形成;3.过表达miR-187可促进TNBC细胞的侵袭和迁移,抑制miR-187可抑制TNBC细胞的侵袭和迁移;4.生物信息学和双荧光素酶报告系统证实ARRDC3是miR-187的靶基因,Western-Blot结果显示TNBC细胞中miR-187可负调控ARRDC3的蛋白表达水平;5.过表达ARRDC3可抑制miR-187过表达对TNBC细胞增殖,侵袭和迁移的促进作用;6.Western-Blot结果表明ARRDC3在TNBC细胞系和组织中均显著低表达。结论:通过本课题研究,我们首次发现miR-187在TNBC组织及细胞系中高表达;并揭示miR-187通过靶向调控抑癌基因ARRDC3促进TNBC的增殖、侵袭和迁移。研究结果进一步丰富了我们对miRNA参与TNBC发病的认识,为TNBC的治疗提供了新的靶点。