强直性脊柱炎是一种慢性炎症疾病,由于早期症状与一般关节疼痛病相似,容易产生误诊与漏诊,造成病情无法得到有效控制,严重会导致残疾。本文依据强直性脊柱炎与人白细胞抗原HLA-B27的相关性,通过流式细胞仪检测人外周血T淋巴细胞群中HLA-B27抗原的表达,建立一种定性判断HLA-B27阴性或者阳性的方法,以辅助临床诊断强直性脊柱炎。首先,对不同供应商的HLA-B27FITC、CD3 PerCP、HLA-B7单克隆抗体做效价评估,采用标准细胞株和临床HLA-B27阳性表达样本,确定各抗体的最佳使用浓度分别为 HLA-B27 FITC 0.08 μ g/Test、CD3 PerCP 0.125 μ g/Test 和 HLA-B7 0.25 μg/Test,检测结果的分辨率、荧光效率均能达到要求。其次,将三种单克隆抗体形成组合试剂,建立基于流式细胞仪定性检测HLA-B27的方法。与常规RT-PCR法比较,采用临床上已知HLA-B7阴性和阳性表达的样本建立流式细胞法定性判断的阈值,实验发现HLA-B27阴性和阳性样本的荧光强度存在明显区分,进一步通过ROC曲线选择灵敏度和特异性都大于0.97以上的阈值点,确定阳性判断阈值为9138,阴性判断阈值为6801。为了消除仪器间的差异,使用标准荧光微球校正不同流式细胞仪,经过校正的检测结果一致性达到100%。。最后,对方法的可靠性进行验证,包括符合率、精密度、线性范围和分析特异性。发现本文方法与常规RT-PCR法的符合率为100%,批内精密度和批间精密度变异系数值均小于5%。当临床样本的细胞浓度在0.5～40×103/μ L范围时,仍能保证准确性。考察了血清中干扰交叉物质影响,当类风湿因子≤29.0 IU/mL、胆固醇≤272 mg/dL、胆红素≤7.35 mg/dL、催乳素≤27.8 ng/L、孕酮≤30.0 ng/ml、人绒毛膜促性腺激素≤139 IU/L、促甲状腺激素≤36.4 mIU/L时,无交叉干扰。本文筛选合适的单克隆抗体,以流式细胞仪作为检测平台,建立HLA-B27抗原的定性检测方法,并验证了方法的可靠性,为强直性脊柱炎的临床普筛应用打下良好的基础。