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第一部分:EIF3B在肝细胞癌癌组织中的表达及临床意义 目的:检测肝细胞癌癌组织及肝癌细胞株中EIF3B的表达水平,并分析其表达水平与肝细胞癌的临床病理特征参数的关系。 方法:采用实时荧光定量 PCR(RT-PCR)技术检测新鲜手术标本和肝癌细胞株的EIF3B mRNA水平,采用免疫组化方法检测肝癌组织芯片EIF3B蛋白表达水平,比较肝癌组织和癌旁组织EIF3B的表达水平差异,分析肝癌组织中EIF3B的表达水平与病人临床病理参数的关联性。 结果:与癌旁组织相比,新鲜标本中癌组织EIF3B mRNA的表达水平明显增高;EIF3B在肝癌细胞株中表达;组织芯片中,EIF3B在细胞胞浆中表达,肝癌组织中EIF3B表达水平高于癌旁组织;EIF3B表达水平与病人的性别、年龄、肿瘤的大小等无明显相关性,EIF3B表达水平与肿瘤的临床分期相关,与病人生存率呈负相关。 结论:肝细胞癌中EIF3B高表达,可能在肝细胞癌的发生、发展过程中发挥作用。 第二部分:下调EIF3B的表达能影响肝癌细胞的体内外生物学行为 目的:研究下调肝癌细胞株SMMC-7721中基因 EIF3B的表达对其体内外生物学行为的影响。 方法:采用RNA干扰技术下调EIF3B的表达水平,检测EIF3B下调前后的肝癌细胞 MMC-7721生物学行为的变化。Cellomics细胞计数检测MMC-7721细胞增殖能力;流式细胞仪分析 MMC-7721细胞的细胞周期和凋亡情况;平板克隆形成实验检测 MMC-7721细胞体外克隆形成能力;裸鼠移植瘤模型观察肝癌细胞MMC-7721下调基因 EIF3B表达后在裸鼠皮下移植瘤的生长情况。 结果:下调EIF3B的表达后,和对照组相比,RNA干扰组细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增多,处于G1期的细胞减少,处于S期和G2/M期的细胞增多,体外克隆形成能力减弱,裸鼠体内成瘤能力减弱。 结论:下调 EIF3B的表达能抑制肝癌细胞的体外增殖,促进细胞凋亡,抑制体外克隆形成,改变细胞周期分布,抑制细胞体内成瘤。