目的:　　 1、建立DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠原位肝移植(ROLT)急性排斥反应模型,观察DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠原位肝移植后移植肝脏能否产生免疫排斥反应。监测受者大鼠生存及生化或血清学指标来评价移植肝功能,排斥由组织学确定。2、后用免疫组化法分别检测VEGF、CD68(+)macrophages、CD3(+)T cells；用RT—PCR法分别检测VEGF、IP-10在模型各亚组受体中用药前后肝脏及脾脏组织中的表达；用ELISA方法分别检测用药前后VEGF在其血清中的水平,以了解VEGF的表达或水平状况是否与炎性细胞浸润,新生血管生成,T细胞,移植物存活时间有关系及关系如何。通过以上实验,试图初步探索VEGF在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的作用机制。　　 方法:　　 1、近交系DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠原位肝脏移植急性排斥反应模型的建立。采用经典的由Ka(m)ada和Calne等开创的二袖套法进行大鼠原位肝移植,具体步骤可参见其论文(Surgery1983 Jan;93:64—9)。实验分二组:(1)、DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠间移植为同种异体移植急性排斥组(acute allograft rejectionOLT,OLTa,n=40)；LEW(RT11)-DA(RT1a)大鼠间移植为同系移植耐受对照组(syngeneic OLT,OLTs,n=40)；(2)、两组各取10只观察存活,按移植术后1,3,7天分亚组,每个亚组10只大鼠作进一步实验用。通过监测受者大鼠生存及生化或血清学指标来评价移植肝功能,排斥由组织学确定。　　 2、VEGF在受体血清中的水平测定。将大鼠DA(RT1a)-LEW(RT11)同种异体移植急性排斥反应模型对受体用药的不同分为二组,每个组40只大鼠:分别为A.实验组:VEGF单克隆抗体,经腹腔注入受体大鼠体内。B.对照组:不用药。根据移植后时间的不同,上述实验组又各分为移植术后1,3,7天亚组,每个亚组10只大鼠。各亚组受体大鼠于术后按上述预定的1,3,7天数杀死,分别从下腔静脉取血2ml,用双抗体夹心ELISA法测定各亚组受体大鼠血清中VEGF的水平。　　 3、分组同“2”。免疫组化法分别检测VEGF、CD68(+)macrophages、CD3(+)Tcells等各种指标在模型各亚组受体中用药前后肝脏,脾脏中的表达,目的是为了研究未阻断VEGF的作用及阻断VEGF的作用以后在肝脏中VEGF的表达分别和巨噬细胞、T细胞、新生血管、炎性介质之间是否有关系及关系如何,从而初步揭示VEGF是通过介导汇管区炎症细胞浸润和血管新生的相互作用,而不是通过作用于T细胞而在肝移植急性排斥反应中起着促进作用。　　 4、分组同“2”。用RT—PCR方法分别检测VEGF、IP-10等各种指标在模型各亚组受体中用药前后肝脏中的表达,目的是为了进一步从分子基因水平研究未阻断VEGF的作用及阻断VEGF的作用以后在肝脏中VEGF的表达分别和各炎性细胞及介质之间的相互关系如何,从而进一步揭示汇管区炎症细胞浸润和血管新生的互动和时间上的重叠才是导致肝移植后急性排斥反应的主要机制,为原位肝移植急性排斥反应机理提出新的理论解释。　　 结果:　　 1、DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,肝组织病理改变明显,表现为肝细胞变性严重,有部分灶状及桥状坏死,内皮细胞肿胀明显,肝窦显著充血,明显扩张,汇管区大量炎性细胞浸润,汇管区小静脉、终末肝静脉及中央静脉内皮下淋巴细胞浸润,胆管上皮细胞肿胀,结构破坏,变性坏死,肝小叶结构不清晰。肝脏功能损害进行性加重,1周存活率为30％,达到Banff急性排斥反应标准的中、重度水平。而在未使用免疫抑制剂的情况下,LEW(RT11)-DA(RT1a)大鼠原位肝移植后可产生免疫耐受,其1周存活率为70％,病理检查显示:肝组织形态改变轻微,肝细胞和肝血窦内皮细胞部分变性肿胀,个别肝细胞坏死,汇管区轻度扩张及伴有少量炎性细胞浸润,肝窦轻度充血并伴有少量淋巴细胞浸润,整个肝小叶结构基本正常。肝功能损害较轻,7天左右基本恢复到正常。2、在实验组,肝脏、脾脏组织VEGF、CD68(+)macrophages、IP-10的表达及血浆VEGF水平检测均较对照组为低(P<0.05),而CD3(+)T cells在两组中的表达比较无统计学意义(P>0.05)。3、VEGF表达与受体鼠的存活时间成反比。初步提示血管内皮生长因子是通过介导汇管区炎症细胞浸润和血管新生的相互作用而在肝移植急性排斥反应中起着促进作用。　　 结论:　　 1、近交系DA(RT1a)-LEW(RT11)大鼠之间的原位肝移植模型可产生中、重度的免疫排斥反应,是一种较理想的可作为研究原位肝移植急性排斥反应的动物模型。2、VEGF是通过介导汇管区炎症细胞浸润和血管新生的相互作用而在肝移植急性排斥反应中起着促进作用,从而初步揭示汇管区炎症细胞浸润和血管新生的互动和时间上的重叠才是导致肝移植后急性排斥反应的主要机制,为原位肝移植急性排斥反应机理提出新的理论解释。