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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)是一类慢性炎症性疾病,是血管壁对各种损伤的一种异常反应。脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)是水解甘油三酯(Triglyceride,TG)的关键酶,它影响动脉粥样硬化的形成,巨噬细胞LPL与炎症以及脂质蓄积关系密切,而这两者是促进动脉粥样硬化发生发展的重要因素。Apelin-13是APJ的内源性配体,其与心血管疾病密切相关,并且能够影响动脉粥样硬化的发生发展。然而apelin-13如何通过LPL影响动脉粥样硬化的发生发展其具体机制尚未明确。本研究主要探讨apelin-13能否通过APJ/PKCα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内LPL的表达同时减少脂质蓄积和促炎因子的分泌。目的:探讨apelin-13对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内LPL的m RNA和蛋白水平,以及脂质蓄积和促炎因子的分泌的影响。方法:首先采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测不同浓度(0,1,10,100 n M)apelin-13处理24h以及100 n M apelin-13处理不同时间(0,6,12,24h)后,细胞内胆固醇酯(Cholesterol Ester,CE)、游离胆固醇(Free Cholesterol ester,FC)和总胆固醇(Total cholesterol,TC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa)检测细胞上清液中白介素6(Interleukin-6,IL-6)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)以及肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)水平变化;用免疫印迹法和RT-PCR分别检测细胞内LPL蛋白水平及m RNA的表达。接着运用生物信息学法分析miR-361-5p与人源LPL m RNA 3’UTR序列基本情况;随后采用荧光素酶报告基因分析观察miR-361-5p与人源LPL m RNA 3’UTR的结合情况;之后,我们将G蛋白的抑制剂PTX、PKCαsi RNA或scrambled miR-361-5p、miR-361-5p mimic和miR-361-5p inhibitor分别与apelin-13共处理细胞,观察细胞内LPL蛋白水平和m RNA水平,促炎因子的分泌和胆固醇含量。结果:高效液相色谱检测apelin-13处理后的细胞,结果发现apelin-13能够降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内CE、FC和TC的含量。Elisa实验检测IL-6、IL-1β以及TNF-α的水平,结果显示apelin-13可以减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内促炎因子的分泌。实时定量PCR和Western blot观察LPL的m RNA表达和蛋白水平,实验结果发现apelin-13处理后的细胞内LPL的蛋白水平和m RNA水平明显降低。而当加入PTX预处理、转染PKCαsi RNA或miR-361-5p inhibitor后apelin-13对脂质水平、促炎因子的分泌以及LPL表达的影响随之消失。于是,本课题组推测,apelin-13可能是通过APJ/PKCα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内的LPLm RNA和蛋白水平,进而减少脂质蓄积和炎症因子的水平。结论:Apelin-13通过激活APJ/PKCα/miR-361-5p途径下调LPL的表达,降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内的脂质蓄积和促炎因子的分泌。