白塞病(BD)是一种罕见的系统性血管炎疾病,几乎会影响到身体的各个器官,其特征为眼部、口腔和粘膜溃疡。在某些情况下,血管炎的并发症会导致失明或死亡。没有人知道BD的确切原因,但该病可被归类为自身免疫性疾病。这种疾病经常发生在古丝绸之路沿线国家,在中国,土耳其和日本尤为常见。发达国家的总体发病率很低,因此长期以来无法引起主流科研机构的关注。因此,这种疾病的研究进展相对缓慢。到目前为止,该病仍处于无临床试验状态,无治疗状态,对发病机制尚无基本了解。超过40%的中国患者需要5年以上才能明确诊断出该病。目前的临床诊断仍然依赖于医生的经验判断,因此对该病的自身抗体和自身抗原的相关研究仍然薄弱。自身抗体是许多自身免疫疾病的重要实验室诊断工具,然而,截至目前为止,BD疾病特异性自身抗体还无法成功应用于国内外临床实践。本课题致力于通过建立一套完整的系统生物学方法,结合传统的生物技术和现代蛋白质组学筛选出一些BD疾病潜在自身抗原。在这项研究中,我们使用中国汉族患者的血清鉴定了四种BD疾病潜在自身抗原。膜联蛋白A1(AnnexinA1),hnRNPC1/C2,NUMA的膜突和羧基(C)-末端氨基酸。简而言之,首先,培养HaCaT和EA.hy926细胞以提取总RNA并通过逆转录方法(RT-PCR)获得cDNA。然后,根据来自NCBIGenbank的四种蛋白质基因序列,我们设计了聚合酶链反应(PCR)引物,并用cDNA扩增了它们的基因。将基因插入原核质粒pET-28a(+)中,并将重组质粒转化到感受态大肠杆菌DH5 α细胞中。在PCR验证和测序后,进行二次扩增。然后,将提取的质粒转化到感受态大肠杆菌BL21中。通过诱导0.1mMIPTG,表达蛋白质并用Ni-NTA树脂纯化。之后,进行SDS-PAGE以确认表达和纯化的结果。然后通过应用高通量技术如质谱,蛋白质印迹,免疫沉淀,免疫组织化学,间接免疫荧光和ELISA来确认和验证表达的蛋白质。最后,通过使用最新的软件以及不同的统计方法评估数据。我们的研究结果表明,所有上述自身抗原/自身抗体都是汉族BD患者的免疫靶点。本研究旨在为白塞病提供早期诊断、分子分型和病理探索进行基础研究,为白塞病的检测奠定了坚实的基础。