【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛疱疹病毒I型(BHV-1)引起的一种急性、热性、接触性传染病。此病在全球范围内广泛分布,主要损害牛的呼吸系统及生殖系统,给养牛业带来巨大损失,其所具
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牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛疱疹病毒I型(BHV-1)引起的一种急性、热性、接触性传染病。此病在全球范围内广泛分布,主要损害牛的呼吸系统及生殖系统,给养牛业带来巨大损失,其所具有的潜伏感染性更使得本病防控难度大而难以根除。BHV-1编码的糖蛋白gB具有高度的保守性,在病毒吸附、侵入及感染细胞过程中发挥重要作用,是病毒复制所必需的结构蛋白。该蛋白能够诱导宿主体液及细胞免疫应答,是进行IBRV检测的首选特异性抗原之一。基于此,本文进行了以下三方面的研究:1牛传染性鼻气管炎的血清学和病原学检测为探究IBR在宁夏地区存在繁殖障碍的奶牛群中的流行情况,本研究针对宁夏地区的18个奶牛群中出现繁殖障碍的奶牛进行血清的采集,共计470份,利用酶联免疫吸附试验进行IBR的血清学检测;同时采集疑似IBR感染而死亡的组织病料,共计16份,利用PCR技术进行IBRV的检测。结果显示:所采集血清中存在338份IBR抗体阳性血清,平均阳性率为71.9%:而疑似病料中存在7份IBRV阳性病料。此结果表明牛传染性鼻气管炎已在宁夏地区奶牛群中开始流行。2牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定将经PCR检测鉴定为IBRV阳性的组织脏器反复冻融处理几次之后,取上清接种到MDBK细胞上进行病毒的分离培养。结果从一份疑似IBR感染的犊牛肺脏中分离到了一株病毒,出现了明显的细胞病变,通过病毒中和试验、PCR方法及核酸测序鉴定后,证实在宁夏地区成功分离到了牛传染性鼻气管炎病毒,并将其命名为IBRVYF15株。3 IBRV部分gB蛋白的原核表达对gB蛋白进行抗原性分析,在其胞外区选出一有效片段,并设计合成其特异性引物,以提取的分离株IBRVYF15的病毒基因组为模板扩增出目的片段gBV。得到目的基因后将其插入表达载体pET32a中构成重组质粒,再转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定及Western-blotting分析,得到了预期所需且高效表达的重组蛋白,并且重组蛋白能够与IBR阳性血清发生特异性反应。本研究成功克隆得到了的gB胞外区的基因片段,并通过大肠杆菌进行高效表达,得到能够作为诊断IBRV的有效特异性抗原,为进一步研究gB蛋白的功能特性以及建立有效的牛传染性鼻气管炎ELISA诊断方法奠定了基础。
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