背景和目的脂肪肝是代谢综合症的表现,早期表现为单纯性脂肪变性,其后可能还会发生脂肪性肝炎,肝纤维化,肝硬化。它的高发病率越来越受到重视。积极研究开发治疗脂肪肝的高效、价廉、方便、安全的药物意义重大。本课题探讨建立脂肪肝体外模型和动物模型,观察姜黄素衍生物JZ2、SFR1和四氢姜黄素对体内外脂肪肝模型的保护作用。方法(1)采用油酸作用于肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞株L02的方法在体外建立脂肪肝细胞模型,并应用MTT法筛选姜黄素衍生物JZ2、SFR1及四氢姜黄素作用于肝细胞的非细胞毒浓浓度,以油红O染色,观察不同给药组非细胞毒浓度对细胞内脂滴形成情况,并检测细胞上清液的ALT、AST及γ-GT。从而观察药物在体外抗脂肪肝的作用效果。(2)通过给予高脂饲料、腹腔注射四环素的复合方式建立小鼠脂肪肝的模型,同时给予不同剂量的姜黄素衍生物JZ2、SFR1和四氢姜黄素固体分散剂,于实验第36天,取血及肝组织,计算肝指数、检测血脂及肝功:血清TG、CHO、LDL-C、HDL-C、ALT、AST,肝脏内脂质:肝匀浆TG、CHO;采用肝脏冰冻切片及油红0染色、病理切片等手段观察肝脏的病理变化。从而观察药物在小鼠体内抗脂肪肝的疗效。结果1.(1)通过MTT法筛选出姜黄素衍生物JZ2、SFR1的非细胞作用浓度为100 ug/ml、200 ug/ml、300 ug/ml、400 ug/ml,四氢姜黄素的非细胞作用浓度为10 ug/ml、20 ug/ml、30 ug/ml;(2)油红O染色后,在光镜下观察发现80 ug/ml油酸刺激HepG2细胞24小时后,模型组细胞内有大量的红色脂滴积聚,48小时后红色脂滴开始减少;60 ug/ml油酸刺激L02细胞24小时后,模型组细胞内有大量的红色脂滴积聚,72小时后细胞红色脂滴开始减少。间隔24小时两次给药,药物作用于HepG2细胞48、72小时均未见脂滴减少;药物作用于L02细胞48小时未见脂滴减少;药物作用于L02细胞72小时随着作用浓度的增加细胞内的脂滴逐渐减少。(3)用ImagePro Plus6.0图像分析软件分析药物对油酸刺激48h后L02细胞的油红O染色图片,各给药组与模型组比较,脂滴显著减少(P﹤0.05)。其中四氢姜黄素30ug/ml,JZ2300ug/ml,SFR1400ug/ml差异有极显著性区别(P﹤0.01)(4)检测细胞上清液中ALT、AST、γ-GT,表明四氢姜黄素对肝功能影响较小,JZ2、SFR1对肝功能均有一定影响。2.(1)通过给予高脂饲料、腹腔注射150mg/kg四环素的复合方式成功建立了小鼠脂肪肝的模型,与正常组相比,模型组小鼠的肝指数、血清TG、CHO、LDL-C、ALT、AST以及肝匀浆TG、CHO均显著升高(P<0.05)。肝脏冰冻切片油红0染色、肝脏病理切片及HE染色也证实其发生了脂肪肝病变;(2)与模型组相比,四氢姜黄素固体分散剂对CHO、LDL-C、HDL-C有降低趋势,但在低剂量组作用更显著,部分数据有统计学意义,对TG作用不明显。在肝指数、肝内脂质特别是TG、肝功ALT、AST方面都有下降作用,且有明显的剂量依赖关系。200mg/kg组、300mg/kg组对肝指数、肝内脂质(TG)、肝功ALT的改善具有统计学意义。冰冻切片油红0染色及病理切片也证明四氢姜黄素对小鼠脂肪肝的保护作用。(3)与模型组比较,姜黄素衍生物JZ2在高、低剂量组对血脂TG、CHO、LDL-C有不同程度的降低,部分数据有统计学意义, TG、HDL-C在低剂量组作用更好。SFR1高低剂量对血脂CHO、LDL-C不同程度的降低,部分数据有统计学意义,但对TG影响不理想。两药对小鼠的肝指数、肝脏内脂质无明显作用。冰冻切片油红0染色及病理切片与模型组比较没有明显区别。结论(1)建立了较稳定的脂肪肝体外筛药模型:油酸刺激L02细胞48小时,在油酸刺激前24小时药物给药一次,24小时后与油酸一起再给药一次,可以筛选出药物的体外抗脂肪肝作用。(2)建立了小鼠脂肪肝模型:高脂饲料、腹腔注射150mg/kg四环素。(3)姜黄素衍生物JZ2、SFR1与四氢姜黄素均具有一定干预脂肪肝体外模型的作用,有效减少细胞内脂滴的形成,四氢姜黄素四氢姜黄素对肝功影响较小,JZ2、SFR1对肝功影响均较大。(4)姜黄素衍生物JZ2、SFR1在1000mg/kg内对血脂有改善作用,但对脂肪肝没有保护作用。(5)四氢姜黄素固体分散剂对血脂有改善作用,但在低剂量100mg/kg作用更显著,对脂肪肝有保护作用。