第一部分前哨淋巴结检测对喉癌治疗的临床应用价值目的分析^99m锝-硫胶体(Technetium sulfur colloid,⁹⁹Tc^m-SC)显像的核素法、术中蓝染法以及核素法与蓝染法结合的联合法对喉癌前哨淋巴结（Sentinel Lymph Nodes,SLN）检测率,探索有效的喉癌SLN的检测方法;了解不同类型喉癌的SLN的分布特征,为cN₀期喉癌的颈淋巴结治疗提供依据。研究¹⁸F-氟代脱氧葡萄糖(¹⁸F-fluorodeoxyglucose,¹⁸F-FDG)SPECT-CT显像对喉癌原发肿瘤的诊断、临床分期、颈部淋巴结转移的临床价值。方法41例cN₀喉癌患者术前使用软性内镜喷洒管在肿瘤周围注射⁹⁹Tc^m-SC,进行SLN显像。注射⁹⁹Tc^m-SC后每15分钟进行平面显像和SPECT-CT显像直到SLN显影。手术中在注射⁹⁹Tc^m-SC的部位注射亚甲蓝,并用γ探针探测放射性“热点”。将手术切除的SLN及颈清扫标本行送病理检查。另外,5例喉癌患者术前行¹⁸F-FDG SPECT-CT显像,第5例患者术前一天行⁹⁹Tc^m-SC显像。结果（1）核素法、蓝染法和联合法对SLN的检出率分别为87.80%、70.73%和92.68%有统计学意义（P＜0.05）。核素法、蓝染法和联合法检出SLN的数目有统计学意义（P＜0.01）,核素法和联合法（P＜0.05）与蓝染法和联合法（P＜0.01）检出SLN的数目有统计学意义（P＜0.01）,核素法和蓝染法差别无统计学意义（P＞0.05）。联合法检测声门上型、声门型和贯声门型喉癌的SLN位于Ⅱ区和Ⅲ区,声门下型位于Ⅵ区。声门上型SLN检出率为90.90%（20/22）,Ⅲ区SLN检出率为58.97%（23/39）,Ⅱ区SLN检出率为41.03%（16/39）。声门型SLN检出率为94.12%（16/17）,Ⅲ区SLN检出率为85.71%（18/21）,Ⅱ区SLN检出率为14.29%（3/21）。病理结果示9例患者有淋巴结转移,占22.00%。（2）5例患者术前行¹⁸F-FDG SPECT-CT显像,提示喉部恶性病变。第5例患者联合⁹⁹Tc^m-SC显像,提示SLN有转移。结论核素法和染料法均可探测喉癌的SLN,联合法探测SLN的检测率高于核素法、染料法,因而应用联合法探测cN₀期喉癌的SLN是有效和可行性的方法。对于声门上型和声门型cN₀期喉癌术中侧重Ⅲ区和Ⅱ区的颈部淋巴结清扫。¹⁸F-FDG SPECT-CT显像有助于喉癌原发肿瘤的诊断,可为术前分期和进一步的治疗提供可靠依据。第二部分肿瘤-睾丸抗原的表达与喉癌临床特征相关性的研究目的了解不同分期喉癌患者手术前后的肿瘤-睾丸抗原（cancer-testis antigen,CTA）家族中的MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4的血清学浓度变化情况,筛选喉癌诊断的CTA血清标志物;从蛋白水平了解这些CTA家族成员在喉癌组织及癌旁组织中的表达水平,分析这些指标与喉癌临床特征的相关性;并进一步探讨外科切缘的可行性。方法与鳞状上皮转化及分化的标志（CK-13、CK-19）比较,（1）采用ELISA法检测25例喉鳞患者手术前、手术后血清中的MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4,并进一步检测46例喉鳞患者手术前组、35例喉鳞患者手术后组和15例正常人血清中的五种CTA。（2）采用免疫组化法和Western-blot方法检测35例喉鳞癌患者癌中心区、癌旁0.5cm、癌旁1cm、癌旁2cm和淋巴结中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4的表达情况。结果（1）ELISA法检测25例喉鳞患者手术前、手术后血清中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1和SSX-4浓度有显著性差异（P＜0.05）,SSX-2、CK-13和CK-19手术前后的浓度均无显著性差异（P＞0.05）。在46例喉鳞患者手术前组、35例喉鳞患者手术后组和15例正常人中,MAGE-A1、MAGE-A3和CK-13手术前组和正常人组血清的浓度有显著性差异（P＜0.05）。NY-ESO-1手术前组、手术后组和正常人组血清的浓度均有显著性差异（P＜0.05）。SSX-4的浓度手术前组、正常人组两组之间有统计学差异,手术后组、正常人组两组之间有统计学差异（P＜0.05）。（2）免疫组化法检测七种蛋白在癌中心区、癌旁0.5cm、癌旁1cm、癌旁2cm中的表达逐渐下降,其中MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2、SSX-4（P＜0.05）,而CK-13和CK-19癌中心区＞癌旁0.5cm（P＞0.05）,癌中心区＞癌旁1cm＞癌旁2cm（P＜0.05）。Western-blot方法检测检测的结果与免疫组化法结果相同。结论（1）MAGE-A1和MAGE-A3有可能成为喉鳞癌诊断和预测复发的CTA血清标志物,NY-ESO-1有可能成为喉鳞癌诊断和预测早期复发的CTA血清标志物。（2）MAGE-A1、MAGE-A3、NY-ESO-1、SSX-2和SSX-4这五种CTA指标在喉鳞癌中具有较高的表达率,并从分子生物学角度提示了将临床上距肿瘤边缘0.5cm以上定为外科切缘是相对安全的。