哺乳动物肿瘤抑制基因Discs large homologue1(Dlg1),是膜相关鸟苷酸激酶((m embrane-associated guanylate kinase,MAGUK)家族的一员,通过PDZ区与其他分子相互作用参与微管极化,,心体再定向以及细胞迁移。Dlgl突变时,会出现微丝和微管的异常组装而导致的细胞极性异常,如:柱状上皮细胞去极化和细胞粘附分子的异常分布(吕鸿2010)。小鼠卵母细胞减数分裂过程中Dlgl表现为极性分布,并且这种极性分布与细胞骨架微丝微管之间存在着密切关系。本研究以猪卵母细胞为材料,旨在观察Dlg1在猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育进程中的表达定位,并在此基础上通过RNA干扰技术,引入外源性si RNA,进一步研究Dlgl在这两个发育过程中的作用。试验结果如下:1、通过QRT-PCR检测了猪多种组织细胞中Dlg1的mRNA表达水平。结果发现卵巢组织和肺组织中Dlg1的表达量最高,PEF中表达量最低。2、免疫荧光染色检测猪卵母细胞和早期胚胎中Dlg1的蛋白表达和分布。发现,在GV期猪卵母细胞中,Dlg1在整个胞质和细胞核均匀分布,从GVBD~PreMⅠ开始到MⅡ胞质中Dlg1逐渐向中心聚集,蛋白颗粒更明显,皮质处的分布明显减少;孤雌激活后的早期胚胎中,Dlg1在整个胞质弥散分布,但表达量逐渐下降2cell、4cell、囊胚期分别只有MⅡ期的46.9%、58.4%、29.66%。3、通过QRT-PCR和免疫荧光染色方法来筛选Dlg1的有效siRNA序列,结果显示siRNA-2干扰效率最高,可分别在mRNA和蛋白水平上下调Dlg1表达的82.1%和61.28%。4、通过显微注射的方法将Dlg1 siRNA-2注射到GV期的猪卵母细胞胞浆和孤雌激活后2h的胚胎中。结果显示:siRNA-2注射组的第一极体排出率为25.2%±3.3%,与对照组(73.4%±4.7%)相比显著下降,说明下调Dlg1能显抑制猪卵母细胞体外成熟。而且,免疫荧光染色发现下调Dlg1后影响体减数第一次分裂过程中微管装配及纺锤体的形成;siRNA-2注射组的卵裂率和囊胚率分别为73.3%±0.7%和19.8%±1.8%,与对照组相比(76.9%±2.1%;22.9%±1.35)差异不显著,说明下调Dlg1不影响猪早期胚胎的卵裂率和囊胚率。