解淀粉芽孢杆菌X-278生物片剂的研制及田间试验

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内生解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)X-278分离自辛集市棉田健康棉株,室内和田间药效试验证明,该菌对棉花黄萎病有很好的防治效果并且具有一定的促生作用。内生解淀粉芽孢杆菌X-278有很好的定殖能力,在根内最高定殖量达2.3×105cfu/g,在茎内最高定殖量达1.6x105cfu/g,接种35d后仍有很好的定殖能力。内生解淀粉芽孢杆菌X-278室内对棉花黄萎病的防效高达59.49%,显著提高籽棉产量达53.46kg/亩。通过对X-278菌株脂肽抗生素的薄层层析分析,证明该菌中含有闭合肽键类的物质,其中有的组分与相对迁移率Rf和标样surfactin非常相近;X-278菌株脂肽抗生素的高效液相色谱(HPLC)研究表明,X-278菌株脂肽抗生素中含有保留时间与surfactin相似的成分。棉花是我国很多地区的主要农作物,关系到当地的经济发展。棉花黄萎病对棉花危害较大且发生较多的病害,能极大的影响棉花的产量和质量。生物防治是目前防治土传病害最有效环保的方法,因此利用拮抗微生物防治棉花黄萎病是比较有发展前景的防治方法。我国在微生物农药剂型方面的研究远差于发达国家,为了研究生物农药新剂型,提高生物农药的储存期限,延长其使用寿命,保持其在生产实践中的防治效果,本研究以对棉花黄萎病具有很好防治效果的解淀粉芽孢杆菌X-278为研究对象,并在前期研究的基础上,对X-278摇瓶发酵培养基及发酵条件进行优化,研制了一种在根部使用的微生物片剂,检测该片剂的指标及田间应用效果。获得的主要研究成果如下:1、以内生解淀粉芽孢杆菌X-278为研究对象,采用单因素和双指标正交试验,通过比较抑菌圈及OD600nm,对其液体发酵培养基及发酵条件进行了优化。得到的内生解淀粉芽孢杆菌X-278最适培养基的各组分最佳配比为:葡萄糖1.5%、花生饼2%、硫酸铵0.5%、碳酸钙0.1%、硫酸镁0.5%、氯化钠0.5%;最佳发酵培养条件为初始PH7,培养温度34℃,转速180r/min,种龄为24h,500mL的三角瓶中装液量为150mL,发酵培养基的接种量为2%,发酵时间为72h。优化后得到的发酵液中活菌数达到1.5×1010cfu/mL,对棉花黄萎病的抑菌圈为33.4mm。2、通过对不同载体、营养成分(碳源和氮源)及粘合剂的筛选,研制出了一种便于储存和运输、并可在棉花根部施用的解淀粉芽孢杆菌X-278(以下简称X-278)片剂,并且检测该生物片剂的各项指标,该生物片剂的主要成分为:以硅藻土为载体,以质量分数为15%的葡萄糖为碳源,以质量分数为30%的花生饼为氮源,20%的淀粉浆为粘合剂,通过干法压片得到了外观完整、光洁,色泽均匀且具有一定稳定性的X-278片剂,其含水量(质量分数)为0.5%,菌含量为7.4×107cfu/g,未检测到有其他杂菌存在;-20-37℃保存200d,均能保持很好的稳定性,其中在28℃下保存时稳定性最好。片剂的各指标都符合标准。研制的微生物片剂具有成型性好、工艺简单、省时省力、易于贮存、运输安全等优点。3、采用利福平标记法测定了X-278在棉花根、茎及土壤中的定殖能力。采用随机区组设计进行田间试验,研究了解淀粉芽孢杆菌X-278微生物片剂、发酵液、可湿性粉剂对棉花黄萎病的田间防治效果,结果表明在棉花根部施用X-278片剂40d后,X-278的最高定殖量在棉花根内为1.56×103cfu/g,在茎中为3.6×103cfu/g,在根际土壤中达3.8×106cfu/g,持效期达60d;田间试验结果表明,X-278片剂对棉花黄萎病的防治效果均优于其发酵液及枯草芽孢杆菌可湿性粉剂,当X-278片剂施用量为0.6g/株时,对棉花黄萎病的防效达到86.34%。
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