基于单克隆抗体的氯霉素ELISA研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:crosswind123
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本论文制备了一种能够识别兽药氯霉素的单克隆抗体,并建立了一种用于检测海产品中氯霉素残留的酶联免疫方法。本论文还制备了能够识别卵类黏蛋白的单克隆抗体。利用活化酯反应将经化学合成反应制得的氯霉素半抗原连接到载体蛋白KLH上,形成氯霉素人工抗原,并免疫小鼠。取小鼠脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经过细胞筛选、细胞克隆获得了一株能够稳定分泌抗氯霉素单克隆抗体的细胞株10A3B6E。经小鼠体内培养制备腹水并经纯化得到单克隆抗体。利用亚型鉴定试剂盒进行鉴定,得到抗体的重链亚型为IgG1,轻链亚型为Kappa.通过对免疫分析方法工作条件的优化,建立了一种简便、快捷、实用的氯霉素直接竞争ELISA方法。单克隆抗体包被量为0.02μg/孔;封闭液为0.5%脱脂乳粉;样品稀释液为0.05mol/L.pH5.7的PBS;该直接竞争ELISA方法IC50值为0.54±0.04ng/mL.IC15值为0.10±0.03ng/mL。与3种氯霉素结构类似物和2种其它兽药的交叉反应(氯霉素琥珀酸钠、甲砜霉素、氟甲砜霉素、链霉素、四环素)分别为78%、0.09%、0.25%、0.05%和<0.002%。此结果说明制备的抗体特异性较好。按照10、30、100ng/g的添加量添加氯霉素至鳕鱼和对虾样品中,测得其回收率为62.2%-120%,变异系数在0.94%-13.52%之间,有较好的精密度。
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