天麻质量控制及体内代谢动力学研究

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天麻(Gastrodia elata Bl.)是兰科植物天麻的干燥块茎,是我国常用的传统名贵中药,《神农本草经》将其列为上品,《中国药典》各版将其列为收藏品种,2002年被国家卫生部列为保健食品名单。主要成分含有酚类及其苷类,有“治风之神药”之称。对中枢神经系统和心血管系统有很好的保护作用,具有增加机体免疫功能、抗炎和促智抗衰老的功效,最新研究表明天麻还有平喘的功效。然而,天麻药效物质的作用机制研究比较薄弱,制约了天麻医药产业的深度开发。为对天麻作用物质基础和作用机制复杂性的阐明提供科学依据,本论文在课题组前期进行天麻药代动力学研究的基础上,开展了天麻的血清药物化学研究,以体内多种移行成分来控制天麻药材的内在质量,同时,以天麻药材为研究对象,分析各组分在动物体内的动态变化和时-量关系。以期为评价天麻有效成分在体内代谢过程中的内在质量,探讨天麻药理毒理作用,促进新药研发和剂型改进提供科学依据。具体研究如下:一、基于入血成分的天麻中天麻素和巴利森苷的含量测定研究建立并验证了UPLC-ESI-MS/MS法测定大鼠血浆中天麻素(GAS)和巴利森苷(PA)的含量方法,结果表明,大鼠口服天麻提取物后,GAS和PA均以原型入血。结合HPLC检测技术,建立并验证了RP-HPLC法测定天麻中GAS和PA的含量方法,方法学考察结果表明,该方法精密度高,稳定性好,线性关系良好,平均回收率均在95%以上。用所建立的RP-HPLC含量测定方法测定10批天麻药材中入血成分的含量,结果表明不同产地天麻中GAS含量较稳定,PA含量差别很大。在中药血清药物化学的指导下,分析口服给药后入血成分,以血中移行成分来控制药材的内在质量,能更加客观全面的评价药材真实质量,为中药质量控制提供了新思路。二、口服天麻微粉和提取物后天麻素和巴利森苷的组织分布研究建立并验证了UPLC-ESI-MS/MS法测定大鼠各组织中GAS和PA的含量方法。该方法灵敏度高、准确度高、无基质干扰。利用该方法对单次灌胃天麻微粉和提取物后,GAS和PA在大鼠各组织(包括脑、心、肝、脾、肺和肾六个组织)中的分布情况进行研究。结果表明:灌胃4 g·kg-1天麻微粉后,GAS和PA均能快速分布到心、肝、脾、肺、肾中,其中肾和肺中含量最高;脑组织中,PA有一定分布,但未检测到GAS。灌胃600 mg·kg-1天麻提取物(相当于4 g·kg-1生药材)后,GAS和PA均能快速分布到心、肝、脾、肺、肾中,其中肾中含量最高;在脑组织中,PA有一定分布,但未检测到GAS。组织分布数据表明:不同给药形式的组织分布特征基本一致,PA在体内代谢速率比GAS快;与提取物给药相比,微粉给药后两组分在各组织中含量高且代谢时间长。三、天麻提取物中天麻素和巴利森苷的脑组织药动学研究单次灌胃10.50 g·kg-1天麻提取物后,在脑组织中能检测到GAS,浓度为878.66 ng·g-1,整个脑组织中含量为1052.87 ng;PA浓度为1289.78 ng·g-1,整个脑组织中含量为1540.90 ng。结果表明:增大给药剂量后,GAS和PA均能在脑组织中检测到;此外,两组分在肾和肺中可能存在蓄积现象。四、天麻中天麻素的提取工艺研究此外,本论文还采用单因素试验结合响应面法对天麻中GAS的提取工艺进行了优化。最佳提取工艺参数为:热回流提取,以水为提取溶剂,料液比1:12.56(g:m L),提取时间3.54 h,p H 5.23,在此条件下GAS的提取量为8.29 mg·g-1,与理论预测值的误差仅为1.2%。该工艺环保且提取率高,能为天麻的工业生产提供依据。
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