基于碳纳米材料检测肿瘤标志物的研究

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第一章,首先对发光即化学发光和荧光的基本原理进行了简单的介绍。然后对生物传感器(包括化学发光传感器,荧光传感器)检测原理以及研究进展进行了详细的综述,并阐述了碳纳米材料在生物传感中的应用。第二章,本章制备了活性碳纳米管(CNTs-COOH)以及氧化石墨烯(GO)两种纳米材料,并通过透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱分析(FT-IR)对其进行了初步表征。根据TEM照片显示氧化石墨烯(GO)的形貌为薄层片装,最小片段可达50nm左右;碳纳米管(CNTs-COOH)为管状纳米级材料,没有固定的长度,管径分布在510nm左右。并通过FT-IR对CNTs-COOH的官能团表征显示管上含有大量的COOH基团。第三章,采用流动注射化学发光检测的方法,基于氧化石墨烯放大体系,对目标RNA进行了定量分析检测。检测目标RNA的最佳检测条件为,缓冲载液pH为8.0的1.0×10-2mol/L的PBS缓冲溶液,H2O2溶液浓度为8.0×10-3mol/L,Luminol的浓度为0.4×10-3mol/L,Hemin的浓度为1.0×10-4mol/L。设置负高压400V,增益为1,主泵转速为40rad/min,负泵转速为10rad/min,75min为体系最佳的孵育时间。在此条件下,对目标RNA进行了检测,得到线性范围5.0×10-138.0×10-11mol/L,线性回归系数为0.9968,检测限为5.0×10-13mol/L。对浓度为1.0×10-11mol/L的目标DNA进行10次平行检测分析,得到的相对标准偏差(RSD)为8.7%。第四章,构建了碳纳米管荧光传感器,并通过该方法对K562细胞中的谷胱甘肽(GSH)进行了定量分析。所使用的荧光试剂是荧光素(FAM)。确定了检测谷胱甘肽的最佳实验条件是:缓冲液为pH=7.0的2.0×10-2mol/LTirs-HCl溶液,设置激发波长为490nm,响应为0.004s,PMT电压为700V,扫描速度为1200nm/min,此时对游离的GSH的检测范围为1.0×10-81.0×10-6mol/L,线性相关系数为0.99416(n=12),检测限为1.0×10-8mol/L。对K562细胞中GSH进行了检测,测得单个K562细胞中GSH的含量为40.983.1fmol,回收率在93.9105.7%之间。
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